[发明专利]一种高效提高多聚体分离分辨率的亲和纯化工艺

摘要

本发明提供一种新型有效的提高多聚体分离分辨率的亲和纯化工艺，其具体步骤包括：步骤1、处理亲和填料，上样；步骤2、淋洗，使用洗2和淋洗3缓冲液淋洗层析柱；步骤3、洗脱，使用pH2.8～5.7的洗脱缓冲液或者含有添加剂的洗脱缓冲液洗脱产品并收集产品；4、洗脱方法的开发除了洗脱pH条件及添加剂之外，还通过从线性梯度洗脱到一步洗脱的优化。本发明突破了传统思维，即仅将亲和步骤作为粗纯步骤，所发明的工艺，能够通过亲和步骤有效去除多聚体，从而起到精纯目的蛋白的作用，且该工艺已经通过15‑200L工艺放大以及除病毒工艺验证，适用范围广，可广泛适用于抗体类蛋白质，从而为有效控制抗体类药物中多聚体的含量提供强有力的技术支持。

主权项

1.一种有效提高多聚体分离分辨率和多聚体去除效率的亲和纯化工艺，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、处理亲和填料，上样；步骤2、淋洗，使用淋洗2和淋洗3缓冲液淋洗柱层析；所述淋洗2缓冲液为Tris‑盐酸、醋酸‑醋酸钠缓冲液、柠檬酸缓冲液或磷酸缓冲液，其pH为4.1～5.7、浓度为20‑50mM；所述淋洗3缓冲液为醋酸‑醋酸钠缓冲液或柠檬酸缓冲液，其浓度为20‑50mM，pH为5.2～5.7；步骤3、洗脱，用3‑25倍洗脱缓冲液梯度洗脱产品；所述洗脱缓冲液为pH为2.8～5.7、浓度为20‑50mM的Tris‑盐酸、醋酸‑醋酸钠缓冲液、柠檬酸缓冲液或磷酸缓冲液；所述洗脱缓冲液还含有氯化钠、组氨酸、或精氨酸盐酸中的至少一种作为添加剂，其中，氯化钠的浓度为0‑1M，组氨酸浓度为0‑1M，精氨酸盐酸的浓度为0‑1M。