[发明专利]一种用于分枝杆菌的脂质萃取方法

摘要

本发明提供了一种用于分枝杆菌的脂质萃取方法，通过优化后的几种混合试剂对分枝杆菌进行高效率的脂质萃取。本发明的用于分枝杆菌的脂质萃取方法，操作简单，成本低廉，同时石油醚相比传统试剂更为安全，来源方便，对脂质的溶解度也更大，有效地提高了分枝杆菌脂质提取的萃取效率和萃取纯度。

主权项

1.一种用于分枝杆菌的脂质萃取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：准备分枝杆菌烘干进行称重，将分支杆菌加入至离心管A中，向离心管A中每1g干重分枝杆菌菌体加入3mL甲醇和0.3％NaCl的混合试剂，混悬1h～2h后离心，离心转速3000rpm，离心15min收取分枝杆菌至离心管B；步骤二：根据步骤一中烘干后的分支杆菌的称重重量，每1g干重分枝杆菌菌体加入3mL氯仿、甲醇和水的混合试剂到离心管B，在37℃～45℃的条件下萃取30min；步骤三：根据步骤一中烘干后的分支杆菌的称重重量，每1g干重分枝杆菌菌体加入2mL正己烷、甲醇和磷酸的混合试剂至离心管B中，再加入1mL石油醚进行离心，离心转速3500rpm，离心5min后将上层液体移去新的离心管C；步骤四：根据步骤一中烘干后的分支杆菌的称重重量，接着每1g干重分枝杆菌菌体再向离心管B中加入1mL正己烷和1mL石油醚混匀1h，萃取后进行离心，离心转速3500rpm，离心5min后再将上层液体移去步骤3中的离心管C，将两次上层液体合并；步骤五：将合并后的液体进行浓缩，根据步骤一中烘干后的分支杆菌的称重重量，浓缩液每1g干重分枝杆菌菌体以6ml的冷丙酮沉淀3次；步骤六：根据步骤一中烘干后的分支杆菌的称重重量，将沉淀每1g干重分枝杆菌菌体用12mL正己烷和石油醚的混合试剂溶解；步骤七：将溶解液在氮气吹干仪下干燥，析出脂质。