[发明专利]一种幽门螺杆菌液体培养方法

摘要

本申请涉及细菌培养技术领域，具体公开了幽门螺杆菌液体培养方法，取脑心浸液9mL、胎牛血清1mL、H.pylori选择剂400μL制成H.pylori液体培养基，将H.pylori接种于H.pylori液体培养基，在厌氧罐中通过微需氧袋建立微需氧条件，于37℃振荡培养3d。液体培养第3天时可见培养基明显浑浊，涂抹少量菌液于无抗生素的哥伦比亚血琼脂平板培养，肉眼未见污染菌生长，并有透明、针尖样的菌落长出；革兰染色后，液体培养基中的H.pylori则多为螺旋短杆状、亦见部分长丝状细菌，有的互相缠绕聚集成团，有的散在分布；进行尿素酶、氧化酶及触酶试验，结果均为阳性。

主权项

1.幽门螺杆菌液体培养方法，其特征在于：包括如下步骤；步骤(1)：H.pylori固体培养(a1)取质量比为3～4/85～95的哥伦比亚琼脂粉和蒸馏水，并将哥伦比亚琼脂粉溶于蒸馏水中获得溶解质A；(b1)将溶解质A在110～120℃的环境中高压灭菌10～20min；(c1)待溶解质A的温度降低至45～50℃，向溶解质A中加入无菌脱纤维羊血和H.pylori选择剂，溶解质A、无菌脱纤维羊血和H.pylori选择剂的体积比为85～95/10～15/0.4～0.8，混合均匀后快速制板，冷却后获得哥伦比亚血琼脂平板；(d1)取冻存的H.pylori标准株NCTC11639至35～37℃的水中水浴至完全融化，并接种于哥伦比亚血琼脂平板上；(e1)将哥伦比亚血琼脂平板放入内部温度为35～37℃厌氧罐中恒温培养3d，厌氧罐内初始时的气体含量为5％O2、10％CO2、85％N2的微需氧环境；步骤(2)：H.pylori液体培养(a2)取质量比为3～4/90的脑心浸液粉和双蒸水，并将脑心浸液粉溶于双蒸水中制成脑心浸液；(b2)将脑心浸液在110～120℃的环境中高压灭菌10～20min；(c2)取体积比为8～10/1～2/0.4～0.8的脑心浸液、胎牛血清和H.pylori选择剂混合并制成H.pylori液体培养基；(d2)向T25细胞培养瓶中加入10～12mL H.pylori液体培养基，取出已固体培养3d的哥伦比亚血琼脂平板，并刮取菌苔加入T25细胞培养瓶，使H.pylori液体培养基与菌苔混合均匀；(e2)将T25细胞培养瓶置于厌氧罐中，并将厌氧罐内建立为空气含量为5％O2、10％CO2、85％N2的微需氧环境，密封厌氧罐并将厌氧罐置于空气摇床上，环境温度控制在35～37℃下培养3d。