[发明专利]一种稳定表达mCherry-tau的细胞系及其构建方法与应用在审
| 申请号： | 201910206151.5 | 申请日： | 2019-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN110055280A | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 陈杰瑞;刘琼;肖时峰;李楠 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 深圳市君胜知识产权代理事务所(普通合伙) 44268 | 代理人： | 王永文;刘文求 |
| 地址： | 518060 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种稳定表达mCherry‑tau的细胞系及其构建方法与应用，所述方法包括步骤：预先制备重组质粒pLVX‑mCherry‑tau；将所述重组质粒pLVX‑mCherry‑tau与psPAX2以及pMD2.G混合并转染至HEK293T细胞中，获得含有mCherry‑tau基因的慢病毒颗粒；将所述慢病毒颗粒感染HEK293细胞，采用含有嘌呤霉素的培养基对慢病毒颗粒感染的HEK293细胞进行抗性筛选，获得稳定表达mCherry‑tau的细胞系。本发明构建的细胞系可用于筛选阻断tau表达和聚集的化合物，为开发抑制tau蛋白的表达、聚集、扩散和蔓延，从而治疗AD的药物，提供了一个筛选工具和平台。 | ||
| 搜索关键词： | 慢病毒颗粒 稳定表达 构建 筛选 制备重组质粒 抗性筛选 重组质粒 嘌呤霉素 培养基 感染 可用 转染 应用 扩散 基因 治疗 开发 | ||
【主权项】：
1.一种稳定表达mCherry‑tau的细胞系的构建方法，其特征在于，包括步骤：对tau基因片段和pLVX‑mcherry载体进行同源重组，获得重组质粒pLVX‑mCherry‑tau；将所述重组质粒pLVX‑mCherry‑tau与psPAX2以及pMD2.G混合并转染至HEK293T细胞中，培养预定时间后，获得含有mCherry‑tau基因的慢病毒颗粒；将所述含有mCherry‑tau基因的慢病毒颗粒感染HEK293细胞，之后采用含有嘌呤霉素的培养基对所述慢病毒颗粒感染的HEK293细胞进行抗性筛选，获得稳定表达mCherry‑tau的细胞系。
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