[发明专利]一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法

摘要

本发明公开一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法，包括以下操作步骤：(1)取正常妊娠第4天小鼠的子宫组织的组织块；(2)将组织块行消化处理后，得到小鼠子宫原代基质细胞的单细胞悬液；(3)将单细胞悬液培养至细胞密度达到75‑85％汇合后，换液，去除杂细胞后，向其中加入诱导培养基，诱导小鼠子宫原代基质细胞发生蜕膜化。本发明提供的一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法，操作简单，可使得分离出的小鼠子宫原代基质细胞具有较高的存活率，同时启动蜕膜化的成功率较高，为研究人员对蜕膜化机制的研究奠定了基础。

主权项

1.一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：(1)取正常妊娠第4天小鼠的子宫组织，采用胰酶溶液消化处理后，去除上皮细胞，得到组织块；(2)将组织块采用质量分数为0.2％的胶原酶II再次进行消化处理后，向其中加入组织块质量10‑15％的离心助剂，然后将混合物进行离心处理，弃去上清液后，加入质量分数为10％的PBS溶液调整细胞浓度，得到小鼠子宫原代基质细胞的单细胞悬液，其中离心助剂由以下重量份的组分制成：干酪素钠17‑22份、透明质酸钠25‑30份、α‑酮戊二酸13‑16份；(3)将步骤(2)得到的单细胞悬液培养至细胞密度达到75‑85％汇合后，换液，去除杂细胞后，向其中加入诱导培养基，诱导小鼠子宫原代基质细胞发生蜕膜化，其中诱导培养基为含有10‑15nM 17β‑雌二醇、1‑3μM孕酮、8‑12μM盐酸异丙肾上腺素和2％质量分数木炭处理胎牛血清的DMEM‑F12培养基。