[发明专利]一种用于动物细胞种属鉴定的试剂盒及其使用方法

摘要

本发明公开了一种用于动物细胞种属鉴定的试剂盒及使用方法。该使用方法包括：采用Tris‑Gly配制的琼脂糖同工酶胶块，在室温条件下，通过电泳、短暂孵化染色、纯水脱色，即可得到动物细胞的同工酶图谱，通过与对照细胞的同工酶图谱比对即可判定该细胞的种属。该同工酶电泳鉴定细胞种属的方法操作简单、稳定性好、实现条件温和，以上优点使该试剂盒区别于常规同工酶电泳鉴定细胞种属的方法，在动物细胞种属鉴定中，简化了传统实验步骤，降低了科研工作者的工作量，同时提高了实验结果的稳定性和重复性，降低了资源损耗，为体外培养细胞在基础研究和进一步临床研究提供技术支持，在分子生物学领域、生命科学等领域具有良好的应用前景。

主权项

1.一种用于动物细胞种属鉴定的试剂盒，其特征在于，包括：(1)制胶粉剂；(2)Tris‑Gly电泳缓冲液粉剂；(3)显色底物粉剂；(4)细胞裂解液；所述的制胶粉剂包括：EDTA 0.035～0.040g、琼脂糖0.8～0.9g，该粉剂使用时需用100ml Tris‑Gly电泳缓冲液溶解混匀；所述的Tris‑Gly电泳缓冲液粉剂包括：甘氨酸7.055～7.065g、Tris粉1.5～1.6g，该粉剂使用时需用1L的水溶解混匀，pH为8.50～8.60；所述的显色底物粉剂包括乳酸脱氢酶(LD)的显色底物粉剂和葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶(G6PD)的显色底物粉剂、苹果酸脱氢酶(MD)的显色底物粉剂、嘌呤核苷磷酸化酶(NP)的显色底物粉剂，其中乳酸脱氢酶(LD)的显色底物粉剂包括：乳酸钠1.08～1.15g、NAD 1.8～2.0mg、氯化钠2.5～3.0mg、MTT1.8～2.2mg、PMS 0.3～0.5mg；葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶(G6PD)的显色底物粉剂包括：G6PD 45～55mg、NADP 2.7～3.2mg、氯化镁9～13mg、MTT 1.7～2.0mg、PMS0.35～0.52mg；苹果酸脱氢酶(MD)的显色底物粉剂包括：苹果酸钠1.8mg～2.2mg、NAD 3.8～5.2mg、氯化钠2.0～2.7mg、MTT 2.1～2.5mg、PMS 0.2～0.5mg；嘌呤核苷磷酸化酶(NP)的显色底物粉剂包括：肌苷36～45mg、黄嘌呤酶1.2～1.8U、MTT 2.6～3.3mg、PMS 0.9～1.5mg；其中：LD显色底物粉剂使用时需用1.5mL的0.5mol/L Tris‑HCl和2.0～2.5ml的纯水溶解；G6PD显色底物粉剂使用时需用2.0mL的0.5mol/L Tris‑HCl和1.2～1.5ml的纯水溶解；MD显色底物粉剂和NP显色底物粉剂使用时需用2.5mL的0.5mol/L Tris‑HCl和2.0～2.5ml的纯水溶解；所述使用的0.5mol/L Tris‑HCl为Tris粉3.0g，使用时需添加浓盐酸1.0～1.2ml、纯水45～50ml，并调节pH至8.0；所述的细胞裂解液为Triton X‑100，使用时用Tris‑Gly电泳缓冲液稀释50倍。