[发明专利]一种用于16S rDNA可变区定量测序文库构建的接头元件及文库构建方法在审
| 申请号： | 201910042474.5 | 申请日： | 2019-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN109797438A | 公开（公告）日： | 2019-05-24 |
| 发明（设计）人： | 吴启家;王琳;贾晓;吴志坤 | 申请（专利权）人： | 武汉康测科技有限公司 |
| 主分类号： | C40B80/00 | 分类号： | C40B80/00;C40B50/06;G16B40/00;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 彭劲松 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于16S rDNA可变区定量测序文库构建的接头元件及文库构建方法。首先，将双链DNA片段进行平末端修复、5’末端添加磷酸基团、3’末端添加腺嘌呤A，通过连接反应，在处理的DNA片段上连接接头元件，该接头元件为两条互补配对的DNA寡核苷酸链，其中一条链的序列从5’到3’依次为固定序列FS、可变序列VS、铰链序列B，3’末端为一个突出的碱基T；与另一条互补序列形成一端具有单个突出碱基T的双链结构。所述接头元件为含有不同随机排列组合核苷酸序列的可变序列VS的双链DNA的混合物。采用接头元件可对细菌16S rDNA的可变区构建定量测序文库，定量检测样品中的微生物、实现细菌株系的鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 接头元件 测序文库 可变区 构建 可变序列 文库构建 双链DNA片段 核苷酸序列 定量检测 固定序列 互补配对 互补序列 铰链序列 连接反应 连接接头 磷酸基团 双链结构 随机排列 突出碱基 细菌株系 双链DNA 混合物 平末端 腺嘌呤 碱基T 条链 微生物 细菌 修复 | ||
【主权项】：
1.一种用于高通量测序平台的16S rDNA可变区定量测序文库构建的接头元件，其特征在于，所述接头元件为两条互补配对的DNA寡核苷酸，其中一条链的序列从5’到3’依次为固定序列FS、可变序列VS、铰链序列HB，3’末端为一个突出的碱基T；与另一条互补序列形成一端具有单个突出碱基T的双链结；所述接头元件中铰链序列HB为6～15个互补配对的碱基；可变序列VS包含4～15个随机排列组合的核苷酸，固定序列FS为文库扩增时PCR引物的识别序列；所述接头元件为含有不同随机排列组合核苷酸序列的可变序列VS的双链DNA的混合物。
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