[发明专利]基于LC-MS/MS的用于表征蛋白的方法有效
| 申请号： | 201880029876.5 | 申请日： | 2018-03-08 |
| 公开（公告）号： | CN110691971B | 公开（公告）日： | 2021-08-13 |
| 发明（设计）人： | 苏珊·麦金托什;米歇尔·科尔格雷夫;克伦·伯恩;乔·凯恩;周学荣 | 申请（专利权）人： | 纽希得私人有限公司;联邦科学与工业研究组织 |
| 主分类号： | G01N33/483 | 分类号： | G01N33/483;G01N27/62;G01N27/72;G01N30/68;H01J49/26;C12Q1/37 |
| 代理公司： | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人： | 王玮玮;郑霞 |
| 地址： | 澳大利亚*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本文的实施方案提供了分析顽拗性蛋白或膜结合蛋白的体外稳定性的方法，所述方法在包含蛋白水解酶、胃蛋白酶的模拟胃液(SGF)中并且与新型胃蛋白酶‑胰蛋白酶测定组合，使用最先进的质谱方法诸如LC‑MS/MS来监测精确的降解产物。蛋白消化的程度可以通过胃蛋白酶消化产物的出现和胰蛋白酶消化的肽产物的消失(作为完整蛋白的代表(proxy))来评价。本文的实施方案还提供了使用高灵敏度LC‑MRM‑MS定量的蛋白定量方法。本文实施的方法在表征转基因植物诸如被遗传工程化以产生长链ω‑3多不饱和脂肪酸的油菜中产生的蛋白时特别有用。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 lc ms 用于 表征 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于表征靶蛋白的稳定性的方法，所述方法包括以下步骤：/n使靶蛋白经历胃蛋白酶消化；/n获得来自所述胃蛋白酶消化的至少一个时间过程的样品；/n使每个至少一个时间过程的样品的一部分经历胰蛋白酶消化；/n获得来自胃蛋白酶-胰蛋白酶消化的一个时间过程的样品；/n收集针对每个胃蛋白酶和胃蛋白酶-胰蛋白酶样品的LC-MS/MS数据；/n根据所述LC-MS/MS数据确定靶蛋白消化的动力学和所述靶蛋白的特定区域对蛋白水解的易感性。/n
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