[发明专利]一种冰灯玉露体细胞胚胎发生及植株再生方法

摘要

本发明公开了一种冰灯玉露体细胞胚胎发生及植株再生方法，该方法为：通过消毒清洗、叶片胚性愈伤组织诱导、胚性愈伤组织成熟与分化、分化芽生根诱导和移栽驯化获得冰灯玉露，本发明以上部分叶为外植体，胚性愈伤诱导的适宜培养基为MS+6‑BA（1.0‑2.0mg·L‑1）+NAA（0.1mg·L‑1）+2,4‑D（0.2mg·L‑1）+琼脂（6g·L‑1）+蔗糖（30mg·L‑1）；体细胞胚胎成熟分化培养基为MS+6‑BA（1.0mg·L‑1）+NAA（0.1mg·L‑1）+琼脂（6g·L‑1）+蔗糖（30g·L‑1），1/2MS培养基中添加IBA1.0g·L‑1、琼脂6g·L‑1和蔗糖30g·L‑1对体胚分化苗进行生根诱导，诱导率最高为76%，培养基中添加活性炭不利于生根诱导。

主权项

1.一种冰灯玉露体细胞胚胎发生及植株再生方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（1）选取生长茂盛，幼嫩无病虫的叶片，对幼嫩叶片进行清洗消毒，用无菌滤纸吸干叶片表面水分后，将叶片切成1cm×1cm大小方块；（2）叶片愈伤组织诱导：用刀片将幼嫩叶片均匀切成上部分叶、中部分叶和下部分叶三部分，选择上部分叶为外植体，接种至MS基本培养基中，MS基本培养基添加6‑BA、NAA、2,4‑D、蔗糖和琼脂，叶片背面朝下，培养条件为暗培养，温度为25±2℃；（3）胚性愈伤组织诱导：将步骤（2）中培养后的组织接种至胚性愈伤诱导培养基中，以MS为基本培养基，培养基中添加分裂素6‑BA、NAA、蔗糖和琼脂，并进行继代培养，培养条件为暗培养，温度为25±2℃；（4）胚性愈伤组织成熟与分化：挑选胚性愈伤组织转移至成熟分化培养基中，成熟分化中添加6‑BA和NAA，培养条件为光培养，光照强度2000lux，16h/d，温度为25±2℃；（5）分化芽生根诱导：取胚性愈伤诱导出的分化芽，以分株或簇状形式接种至1/2MS生根培养基中，生根培养基中添加IBA，培养条件为光培养，光照强度2000lux，16h/d，温度为25±2℃；（6）移栽驯化：分化芽生根30d后，挑选根系较好、叶片翠绿的再生植株，清洗掉根系上的培养基，移栽至已消毒的草炭土中，温室棚内进行驯化，白天温度22‑27℃，夜间温度不低于15℃，空气湿度85%以上。