[发明专利]基于荧光功能金纳米簇的探针检测尿酸及其浓度的方法

摘要

本发明提供了一种基于荧光功能金纳米簇的探针检测尿酸及其浓度的方法。采用尿酸和尿酸氧化酶进行反应原位制备荧光功能的金纳米簇，利用是否产生荧光的结果检测待测物中是否含有尿酸，利用金纳米簇的荧光强度的数值可以定量检测尿酸的浓度，实现荧光金纳米簇在荧光法检测尿酸的应用。该方法避免了生物体中其它氨基酸的干扰，可以选择性和无创地检测尿液、汗液、血液中尿酸的浓度；并利用荧光turn‑on的方法检测尿酸的浓度，避免了实验中的假信号可能带来的干扰；该方法制备的具有优良荧光性质的金纳米簇，在生物医学等领域具有重要的应用价值。

主权项

1.一种基于荧光功能金纳米簇的探针检测尿酸及其浓度的方法，具体步骤如下：(1)配制不同浓度的尿酸(UO)水溶液(100～2000μM)；取其中3.5～4.0mL，加入浓度为50u/mL的尿酸氧化酶(UOx)0.1～0.5mL，并用浓度为1M的NaOH将其pH调至8～8.5；然后置于37～40℃水浴锅中温育2～3h；(2)取上述步骤(1)的不同浓度的混合溶液，依次加入浓度为40mM的甲基丙烯酸(MAA)水溶液0.1～0.4mL，浓度为50mM的FeSO₄水溶液0.01～0.1mL，搅拌反应0.5h后，加入浓度为1mM,pH＝3.0柠檬酸缓冲溶液0.1～0.5mL并搅拌摇匀，室温下反应10～120min；之后用分子量为500～1500Da的透析袋透析12～24h；(3)取上述步骤(2)的不同浓度的混合溶液0.5mL，加入pH为4.0～5.0醋酸缓冲溶液0.5～1.0mL混合，得到的溶液中加入浓度为100mM的HAuCl₄水溶液0.1～0.5mL，还原剂(可以是硼氢化钠、水合肼、柠檬酸钠、抗坏血酸等)，还原剂与HAuCl₄的摩尔比为1～100：1(优选为1～20：1)，搅拌混合均匀；将样品置于波长为356nm的紫外光下辐照2～10分钟，得到金纳米簇最终溶液；(4)重复步骤(1)～(3)，测量不同浓度下的尿酸，测试金纳米簇最终溶液的荧光发射光谱；建立金纳米簇最终溶液的荧光强度的数值与尿酸浓度的定量关系曲线，作为金纳米簇的荧光强度与尿酸浓度的工作曲线；将尿酸溶液替换为待测样品后，按照步骤(1)～(3)进行，得到具有一定荧光强度的金纳米簇的待测样品溶液，当最终溶液含有具有一定荧光强度的金纳米簇时，所述待测样品中含有尿酸；当最终溶液不含有具有荧光强度的金纳米簇时，所述待测样品中不含有尿酸；根据待测样品溶液中金纳米簇的荧光强度，关联定量关系，可以计算得到待测样品中的尿酸浓度。