[发明专利]一种基于NiFe2

摘要

本发明公开一种基于NiFe2O4纳米管催化增强的卵巢癌标志物比率型电致化学发光传感平台，特点是在NiFe2O4纳米管和h‑BN上，分别引入Envision复合物和lucigenin。NiFe2O4纳米管不仅可以承载大量Envision复合物，而且能够催化析氧反应过程释放氧气，引发2‑(二丁基氨基)乙醇的阳极发光；h‑BN可以固载大量lucigenin并且保持其在碱性条件下的发光稳定性；富含辣根过氧化物酶的Envision复合物催化H2O2产生超氧自由基，同时增强两种发光信号。因此，所制得的比率免疫传感器，具有灵敏度高、检测限低等优点，用于人附睾蛋白4的检测，在早期卵巢癌诊断和监控方面具有较为重要的价值。

主权项

1.一种基于NiFe2O4纳米管催化增强的卵巢癌标志物比率型电致化学发光传感平台的制备方法，其特点在于，包括以下步骤：（1） 玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2）取40 μL摩尔浓度比为4:1的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）及N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合液加入到80 μL 浓度为4.2 μg/mL的抗体（Ab1）溶液中，4 ºC下震荡40 min，以达到活化羧基的目的；将80 μL Envision 复合物溶液加入到上述混合溶液中，室温震荡50 min，以完成酰胺反应，从而得到Envision‑Ab1复合物溶液；取200 μL上述复合物加入200 μL 浓度为1 mg/mL NiFe2O4纳米管（NiFe2O4 NTs），在室温下反应4 h，后经洗涤、离心、再分散，最终制得NiFe2O4 NTs/Envision‑Ab1复合物；滴加3 μL上述所得NiFe2O4 NTs/Envision‑Ab1复合物悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得Ab1‑Envision/NiFe2O4 NTs修饰玻碳电极；（3）将步骤（2）制备的修饰玻碳电极置于浓度为1.0 wt.%的BSA溶液中孵育30 min，以封闭电极界面上非特异性结合位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中备用；（4）将步骤（3）获得的修饰电极浸入不同浓度的人附睾蛋白4（HE4）标准溶液中并在4°C冰箱中孵育50 min，用去离子水冲洗电极表面，制得HE4/Ab1‑Envision/NiFe2O4 NTs修饰玻碳电极，并保存在4 °C冰箱中备用；（5）将200 μL浓度为1 mM的光泽精（lucigenin）与200 μL浓度为5 mg/mL六方氮化硼纳米片（h‑BN）混合，室温震荡3 h，经洗涤、离心、再分散制得h‑BN@lucigenin复合物溶液；然后将80 mL 浓度为10 mM的1‑氨基芘（AP）加入到上述复合物溶液中，在室温下混合震荡6 h，以完成π‑π堆叠反应，经洗涤、离心去除过量1‑氨基芘，制得氨基化的h‑BN@lucigenin复合物；随后，在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入80 μL二抗（Ab2），在室温下震荡30 min，经离心、洗涤、再分散制得h‑BN@lucigenin@Ab2生物复合物溶液，然后在上述溶液中加入1 % BSA封闭非特异性吸附位点，储存在4°C冰箱中备用；（6）取3 μL步骤（5）制得的h‑BN@lucigenin@Ab2生物复合物溶液于步骤（4）制备的修饰电极界面，并在4 ºC下孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得h‑BN@lucigenin@Ab2/HE4/Ab1‑Envision/NiFe2O4 NTs修饰玻碳电极, 并保存在4 °C冰箱中备用。