[发明专利]一种适于获得大量高纯度沙门氏菌外膜蛋白的提取方法与应用有效
| 申请号： | 201811356245.2 | 申请日： | 2018-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN109371051B | 公开（公告）日： | 2021-02-19 |
| 发明（设计）人： | 曾振灵;蒋红霞;杨玲;林晓玲;史海洋 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C07K14/255;C07K1/14;A61K39/112;A61P31/04 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 刘瑜 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种适于获得大量高纯度沙门氏菌外膜蛋白的提取方法与应用。该方法包括以下步骤：(1)将沙门氏菌外膜蛋白的基因克隆到表达载体中，然后将得到的重组表达载体导入到宿主沙门菌中，得到重组菌株；(2)将重组菌株扩大培养，再离心收集菌体并冷冻保存，得到冷冻菌体；(3)向冷冻菌体中加入蛋白裂解液，并加入苯甲基磺酰氟溶液，恒温超声破碎，收集蛋白质沉淀；(4)向蛋白质沉淀中加入外膜蛋白提取液，混匀后置于4℃条件下孵育，然后离心，收集上清液；(5)将上清液分离纯化，得到沙门氏菌外膜蛋白。本发明方法步骤简单、操作方便，适用于高纯度高活性外膜蛋白的大量提取，可同时满足蛋白活性、结构和疫苗研发等后续实验要求。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 适于 获得 大量 纯度 沙门氏菌 膜蛋白 提取 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种适于获得大量高纯度沙门氏菌外膜蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将沙门氏菌外膜蛋白的基因克隆到表达载体中，得到重组表达载体；然后将重组表达载体导入宿主沙门菌中，得到重组菌株；(2)将步骤(1)中得到的重组菌株进行扩大培养，然后加入阿拉伯糖，再离心收集菌体并冷冻保存，得到冷冻菌体；(3)向步骤(2)中得到的冷冻菌体中加入蛋白裂解液重悬菌体，并加入苯甲基磺酰氟溶液，混合均匀后恒温超声破碎，然后离心、收集上清，得到上清液I；将上清液I再次离心，收集蛋白质沉淀；(4)向步骤(3)中收集的蛋白质沉淀中加入外膜蛋白提取液，重悬沉淀并充分混匀后置于4℃条件下震荡孵育3～4h，然后离心、收集上清，得到上清液II；(5)将步骤(3)中得到的上清液II进行蛋白分离纯化，得到沙门氏菌外膜蛋白。
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