[发明专利]一种羔羊小肠上皮细胞体外培养方法

摘要

本发明公开一种羔羊小肠上皮细胞体外培养方法，包括如下步骤：组织采集、除菌、消化、清洗、收集、重悬、细胞接种、纯化、传代等过程。本发明改善反刍动物小肠上皮细胞体外培养方法，提供操作步骤简单、花费较低的羔羊小肠上皮细胞体外培养方法，易获得大量纯度较好、活力高、贴壁快的小肠上皮细胞，并且细胞被污染的情况大大降低，培养过程中均无发生细胞被污染的情况。普通小肠上皮细胞分离方法所得的细胞4天后贴壁细胞较少，细胞悬浮呈圆形；而本发明的小肠上皮细胞分离培养方法所得的细胞在4天后贴壁较多，细胞与细胞之间紧密相连、细胞形态呈单层“铺石路”和多角形生长。

主权项

1.一种羔羊小肠上皮细胞体外培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)羔羊屠宰后立即分离并采集小肠，将肠管外部与内部冲洗干净；(2)剔除肠系膜和脂肪组织，抛开肠管并剪成小段，进行涮洗；(3)将肠管在容器中剪成碎片，继续清洗直至上清清澈，离心去除清洗液；(4)将组织碎片倒入无菌容器中中加入胰蛋白酶溶液，进行消化，消化后去掉消化液；(5)消化后清洗组织碎片，将组织倒入新的无菌容器，倒入胰蛋白酶溶液消化，然后开始收集细胞；(6)将含细胞的消化液用细胞滤网过滤到预先加入胎牛血清的离心管中收集细胞；(7)将离心管中的细胞液离心弃上清，沉淀中加入培养基，吹打混匀；(8)调节细胞密度种植到培养瓶，培养瓶培养箱中培养，换瓶培养以去除成纤维细胞；换瓶后继续培养完成铺层，即培养所得的细胞为羔羊小肠上皮细胞。