[发明专利]一种配种动物DNA的提取方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201810991814.4 | 申请日： | 2018-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN108977438A | 公开（公告）日： | 2018-12-11 |
| 发明（设计）人： | 吴晗彬;冯思文;孙祥忠;王佳港 | 申请（专利权）人： | 武汉纳磁生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 武汉臻诚专利代理事务所(普通合伙) 42233 | 代理人： | 胡星驰 |
| 地址： | 430070 湖北省武汉市洪*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种配种动物的DNA提取方法及试剂盒。所述方法包括：(1)取育种用动物精液3μL至10μL；(2)将动物精液与预混有蛋白酶K的裂解液按照体积比1:50至1:180混匀；(3)裂解完成后加结合液和异丙醇；(4)加入结合液以及异丙醇混匀；(5)将结合反应体系加入磁珠吸附；(6)吸附有DNA的磁珠经漂洗处理后进行洗脱。本发明提供的试剂盒，包括裂解液、蛋白酶K溶液、结合液、第一至第三洗涤液、洗脱液、以及磁珠。本发明样本为微量精液，为育种动物所必然会采集的组织样本，采用本发明的提取方法，以微量精液为样本，不会影响育种动物的正常生活，也不会增加分子育种的采样环节，不会带入不确定因素和风险。 | ||
| 搜索关键词： | 结合液 试剂盒 动物精液 育种动物 裂解液 异丙醇 精液 磁珠 混匀 样本 结合反应体系 蛋白酶K溶液 采样环节 磁珠吸附 分子育种 正常生活 组织样本 蛋白酶K 动物DNA 漂洗 体积比 洗涤液 洗脱液 裂解 吸附 洗脱 预混 育种 采集 | ||
【主权项】：
1.一种配种动物DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取育种用动物精液3μL至10μL；(2)将步骤(1)中获得的动物精液与预混有蛋白酶K的裂解液按照体积比1:50至1:180混匀，获得裂解反应体系；(3)将步骤(2)中获得的理解反应体系60℃至70℃裂解0.5小时至1小时，裂解完成后获得经裂解的反应体系；(4)将步骤(3)获得的经裂解的反应体系加入300μL至400μL的结合液、以及350μL至450μL的异丙醇混匀，获得结合反应体系；(5)将步骤(4)中获得的结合反应体系加入10μL至20μL磁珠，混匀后，吸附8分钟至12分钟，获得吸附有DNA的磁珠，吸附期间维持磁珠均匀分散状态；(6)将步骤(5)中获得的吸附有DNA的磁珠，经漂洗处理后进行洗脱，固液分离后获得洗脱液，即为DNA样品。
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