[发明专利]一种节约成本的流式细胞术检测方法

摘要

一种节约成本的流式细胞术检测方法，包括确定细胞用量的方法，包括以下步骤：细胞工作液的梯度稀释‑抗体孵育‑离心‑鉴别细胞死活‑获得结果。本发明的有益效果是：可大大降低检测细胞用量，节约成本，且使得检测结果更加准确；此外，还节约了50%～75%抗体用量，进一步大大降低了成本。

主权项

1.一种节约成本的流式细胞术检测方法，其特征在于，包括确定细胞用量的方法，包括以下步骤：S1, 细胞工作液的梯度稀释: 准备3支1～2mL的离心管，每支加入40～60µL鞘液，以样本细胞（0.5～5）﹡107/50µL加入到第一支离心管，样本细胞（0.5～5）﹡106/50µL加入到第二支离心管，样本细胞（0.5～5）﹡105/50µL加入到第三支离心管，一共得到3种浓度的细胞工作液，其浓度分别为：（0.5～5）﹡107/100µL，（0.5～5）﹡106/100µL，（0.5～5）﹡105/100µL；另外准备一支空白对照管，使细胞浓度为（0.5～5）﹡105/100µL备用；S2, 抗体孵育：向上述每支离心管中加入等量厂商推荐的抗体用量，空白对照管中不加抗体；混匀后4～8℃避光孵育15～20分钟；S3, 离心：每支离心管中加入0.8～1.2mL鞘液，混匀后用离心机以250～350g加速度4～8℃离心3～5分钟；S4，鉴别细胞死活：用移液器移除上清液，每支离心管中加入150～300µL鞘液后混匀重悬，加入7‑氨基‑放射菌素D溶液，使其终浓度为2.5μM/mL，常温下避光孵育3～5分钟，再次进行重悬操作，得到重悬液；S5, 获得结果：将上述重悬液用流式细胞仪上机检测得出数据，用流式数据分析软件打开数据文件，区分出死细胞群和活细胞群，在活细胞群中统计各标志物百分比；对比细胞特定标志物的表达率来在差异不显著条件下确定细胞的最佳用量。