[发明专利]一种降低彩纹秋海棠叶片组织培养褐化率的方法

摘要

本发明涉及一种降低彩纹秋海棠叶片组织培养褐化率的方法，属于植物组织培养技术领域。该方法通过对新鲜彩纹秋海棠幼嫩叶片进行接种前冷藏保存处理，酒精和升汞消毒灭菌后，采用组织培养中不同光照培养方式结合不断转瓶处理，即先暗培养→半黑暗培养→光培养，并且每5~7d转接一次，从而有效防止甚至消除彩纹秋海棠褐化，降低了褐化率并在一定程度上提高其诱导率，促进植物的生长。本发明方法与已有的降低褐变的方法相比，无需增加专用设备，使用浓度小，成本低，操作简便，易于推广应用。

主权项

1.一种降低彩纹秋海棠叶片组织培养褐化率的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），冷藏保存处理：将新鲜的彩纹秋海棠幼嫩叶片在4℃冰箱冷藏保存1~2d；步骤（2），外植体消毒与处理：将步骤（1）处理的幼嫩叶片用洗衣粉水洗净后，先用体积浓度为70%~75%的酒精浸泡20~30s，再用质量浓度为0.1%~0.15%HgCl2溶液处理5~8min，接着用无菌水漂洗多次；然后在无菌条件下用无菌滤纸吸去水分，之后把叶片切成叶盘；步骤（3），暗培养：将步骤（2）得到的叶盘背面划伤口，叶片背面朝下接种初代培养基中，置于黑暗条件下培养5d，培养温度23±2℃；步骤（4），半黑暗培养：将步骤（3）的培养物转接至新的初代培养基中，然后放入纸箱中，盖紧纸箱，在纸箱两侧各切开一条透光缝隙，保证有散射光进入纸箱内，但要避免光直射；将纸箱置于光照培养室内，培养温度23±2℃，光照时间10~12h/d，光照强度2000~3000lx；每5~7d更换一次新的初代培养基，持续转接3~5次；步骤（5），光培养：将步骤（4）的培养物接种至不定芽诱导培养基中，撤去纸箱，直接放置于培养架上进行光照培养，培养温度为23±2℃，光照强度为2000~3000lx，光照时间为10~12h/d；每20~30d继代一次，即可获得不定芽；初代培养基为MS培养基，培养基中添加0.5mg/L 6‑BA、0.1mg/L NAA、30g/L蔗糖、6.5g/L琼脂和2.0g/L活性炭，pH5.8，高温灭菌冷却至室温后待用；不定芽诱导培养基为MS培养基，培养基中添加0.5mg/L 6‑BA、0.1mg/L NAA、30g/L蔗糖、6.5g/L琼脂、2.0g/L活性炭、80mg/L VC，pH5.8，高温灭菌冷却至室温后待用。