[发明专利]生物活性多肽序列的联合鉴定方法

摘要

生物活性多肽序列的联合鉴定方法，本发明涉及一种液相色谱/毛细管电泳串联飞行时间质谱鉴定多肽序列的方法，它要解决现有HPLC‑MS鉴定多肽序列检测方法难以提高多肽检测的数量和种类的问题。联合鉴定方法：一、乳铁蛋白溶解在超纯水中，调节体系pH值至7.0～9.0，加入胰蛋白酶，得到水解产物；二、冷冻干燥获得乳铁蛋白水解肽，加入甲酸水复溶；三、复溶后的水解肽分别采用UPLC‑ESI‑QTOF‑MS和CE‑ESI‑QTOF‑MS进行联合分离及质谱分析；四、从步骤三质谱分析获得的数据中鉴定多肽序列。本发明采用超高效液相色谱和毛细管电泳两种分离设备串联质谱鉴定乳铁蛋白肽，提高了多肽鉴定的数量与种类。

主权项

1.生物活性多肽序列的联合鉴定方法，其特征在于该方法按以下步骤实现：一、乳铁蛋白肽制备：将乳铁蛋白溶解在超纯水中，使用NH4HCO3调节体系pH值至7.0～9.0，按照胰蛋白酶与乳铁蛋白的质量比为1:20～1:50加入胰蛋白酶T6567，得到消化液，在35～38℃环境下消化1～4h，得到水解产物；二、乳铁蛋白肽上样前处理：对步骤一得到的水解产物进行离心处理，获得上清液，然后冷冻干燥得到乳铁蛋白水解肽，使用质量浓度为0.1％～0.5％甲酸水进行复溶，膜过滤后得到复溶后的水解肽；三、复溶后的水解肽分别采用UPLC‑ESI‑QTOF‑MS和CE‑ESI‑QTOF‑MS进行联合分离及质谱分析，即UPLC系统与CE分别与ESI连接，ESI与QTOF相串联；所述的UPLC‑ESI‑QTOF‑MS是将UPLC系统与ESI串联并联用QTOF，UPLC分离乳铁蛋白肽：复溶后的水解肽采用UPLC搭载C18柱进行色谱分离多肽，色谱分离采用乙腈有机相梯度洗脱，其中色谱分离的水相A为超纯水，包含0.1％～0.5％FA，色谱分离的有机相B为乙腈，包含0.1％～0.5％FA，色谱流出组分被ESI离子化后进入QTOF进行质谱分析；所述的CE‑ESI‑QTOF‑MS是将CE毛细管电泳装置与ESI串联并联用QTOF，CE分离乳铁蛋白肽：复溶后的水解肽采用毛细管电泳分离多肽，电泳流出组分被ESI离子化后进入QTOF进行质谱分析；四、从步骤三质谱分析获得的数据中鉴定多肽序列。