[发明专利]一种测定沉积物样品中5种大环内酯类抗生素残留的方法

摘要

本发明公开了一种测定沉积物样品中5种大环内酯类抗生素残留的方法，本发明利用高效液相色谱‑质谱联用技术结合加速溶剂萃取和固相萃取检测沉积物中5种大环内酯类抗生素残留的方法，对沉积物样品使用特制的采集装置进行采集，经冷冻干燥，研磨过筛后经加速溶剂萃取、固相萃取净化、氮气吹干、定容过滤，用高效液相色谱‑质谱联用仪MRM监测离子模式分析，外标法定量。本发明的方法检出限低，稳定性好，回收率高，检测灵敏度高，用于沉积物中5种大环内酯类抗生素的快速筛查，基本能够满足沉积物中目标物残留的检测要求。

主权项

1.一种测定沉积物样品中5种大环内酯类抗生素残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：配制混合标准溶液分别对5种大环内脂类抗生素准确称取，配成质量浓度分别为0.2、1、2、5、10、20、50、100μg/L的混合标准溶液，于4℃下保存；S2：绘制标准曲线用甲醇配制质量浓度分别为0.2，1，2，5，10，20，50和100μg/L的5种大环内酯类抗生素混合标准溶液，以峰面积(y)对目标物的质量浓度(x)绘制标准曲线；S3：样品采集处理通过样品采集装置在采样点采集沉淀物样品，将采集到的沉淀物样品先去除杂物，冷冻干燥后置于不锈钢盒中，温度为30‑50℃下进行研磨，过60目筛，冷冻干燥，‑20℃保存待测；S4：样品前处理准确称取5g(±0.01g)上述经研磨的沉积物样品，于室温下暗处放置24h；在33mL萃取池中加入滤膜置于底层，依次加入2g硅藻土，研磨后的沉积物样品，最后再在上层加入2g硅藻土，设有多个萃取池进行萃取能够在萃取剂的作用下进行相互渗透，更好对沉淀物进行分散处理，保证分散的均匀性，减少萃取剂的用量，每个样品均用甲醇/丙酮(50/50，V/V)为萃取剂，使用戴安350加速溶剂萃取(ASE)系统进行提取，在压力1500psi，温度80℃，保持10分钟，60％的冲洗体积，冲洗60s，循环提取2次，将提取液在40℃下进行水浴旋转蒸发浓缩至2mL左右，再用超纯水稀释到100mL，用4mol/L硫酸调节pH值为4，分别用10mL甲醇、10mL超纯水对Oasis HLB固相萃取小柱活化，控制流速为2ml/min取上述稀释的萃取液，采用活化的HLB固相萃取小柱，控制上样速度约为2‑5mL/min，接着用10mL的超纯水淋洗HLB固相萃取小柱，流速为1.5mL/min，并在负压条件下抽真空30分钟进行干燥，用2mL的2％氨水/甲醇进行洗脱2次，流速为2mL/min，洗脱液氮气吹干，温度为42‑50℃，然后用10％的乙腈/水溶液定容至1mL，涡旋震荡2‑3min；由于激素类药物过膜后会因吸附而发生损失，样品定容后10000g/min离心10min去除可能存在的颗粒物，过微孔滤膜，得到待检样品；S5：高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析a高效液相色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(150mm×2.1mm,3.5um)；流动相：0.2％(V/V)甲酸(A)和甲醇(B)；柱温：30℃；进样体积：5uL；流动相流速为0.3mL/min，梯度洗脱程序：0‑8min，流动相由85％A变为40％A；8.0‑8.5min40％A，8.5‑9.0min90％A，9.0‑12min85％A；b质谱条件：选择电喷雾离子(ESI)源正离子模式扫描，采用半自动进样方式，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5500V；气帘气(curtain gas,CUR)压力为206 851.8Pa；喷雾气(ion source gas 1,GS1)压力为241 327.1Pa；辅助加热气(ion source gas 2,GS2)压力为275 802.4Pa；S6：外标法定量通过高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析后，根据绘制的色谱图计算出样品溶液的峰面积，并通过步骤S2所述的标准曲线计算出样品溶液中的5种大环内酯类抗生素的浓度，通过被测样品的质谱和相关信息，得到其定性和定量结果，定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过规定的范围。