[发明专利]一种不依赖辅因子的全细胞催化合成芳香化合物的方法

摘要

本发明公开了一种不依赖辅因子的全细胞催化合成芳香化合物的方法，其特征在于，芳香化合物的催化合成是以木质素来源的分别以阿魏酸等木质素来源的酚酸为底物，所述全细胞为转入芳香酚单加氧酶基因amp和酚酸脱羧酶基因pad的重组大肠杆菌，在高温和碱性条件下，重组大肠杆菌可以将这些酚酸转化为相应的高价值芳香化合物。这种方法用全新的全细胞催化剂来合成高价值芳香化合物，避免了辅因子的添加，大大提高了效率和节约了成本。本发明为木质素资源的利用开辟了新的技术，具有重要的应用前景。

主权项

1.一种不依赖辅因子的全细胞催化合成芳香化合物的方法，其特征在于，所述芳香化合物的催化合成是以木质素来源的羧酸为底物，所述全细胞为转入芳香酚单加氧酶基因amp和酚酸脱羧酶基因pad的重组大肠杆菌，所述香酚单加氧酶基因amp来源于Thermothelomyces thermophila，蛋白序列为SEQ ID NO.1，所述酚酸脱羧酶基因pad来源于凝结芽孢杆菌Bacillus coagulans，蛋白序列为SEQ ID NO.2，具体包括如下步骤：第一步：重组质粒的构建，将芳香酚单加氧酶基因amp和酚酸脱羧酶基因pad连接入大肠杆菌表达质粒中，第二步：基因工程菌的构建，将重组质粒转入大肠杆菌中，筛选并验证阳性大肠杆菌重组菌株；第三步：全细胞催化液反应液制备，活化并诱导细胞表达芳香酚单加氧酶和酚酸脱羧酶，离心后用的NaHCO3/Na2CO3碱性缓冲液重悬菌体，获得全细胞催化反应液；第四步：以木质素来源的羧酸为底物，以全细胞催化剂生产芳香化合物。