[发明专利]基于酵母表达载体的蛋白微晶包埋鲤疱疹病毒II型-草鱼出血病毒亚单位疫苗的构建方法在审
| 申请号： | 201810534460.0 | 申请日： | 2018-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN108743933A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 贡成良;曹广力;薛仁宇;胡小龙;张婷婷;刘波 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | A61K39/245 | 分类号： | A61K39/245;A61P31/22;A61K39/15;A61K47/42;A61P31/14;A61P7/04;C12N15/81;C12N15/62 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 孙周强;陶海锋 |
| 地址： | 215137 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于酵母表达载体的蛋白微晶包埋鲤疱疹病毒II型‑草鱼出血病毒亚单位疫苗的构建方法，用AOX1启动子控制家蚕质型多角体病毒蛋白基因；用TEF1启动子控制来自于草鱼出血病毒的VP6、VP7和鲤疱疹病毒II型ORF72、ORF66、ORF81、ORF82以及质型多角体病毒VP3的经密码子优化后抗原表位融合序列VP6‑VP7‑ORF72‑ORF66‑ORF81‑ORF82‑VP3，构建酵母表达载体pPICZA‑BmCPVpolh‑GCRV6/7‑CyHV72/66/81/82‑BmCPVVP3。该载体转化酵母菌，用甲醇诱导表达，表达的多抗原表位融合蛋白在家蚕质型多角体病毒VP3引导下包埋进重组家蚕质型多角体蛋白内，形成包埋鲤疱疹病毒II型‑草鱼出血病毒亚单位疫苗的蛋白微晶，该蛋白微晶经碳酸钠－碳酸氢钠溶液裂解，然后用盐酸溶液调pH至7.12，离心后的上清即为鲤疱疹病毒II型‑草鱼出血病毒联合亚单位疫苗抗原。 | ||
| 搜索关键词： | 出血病毒 疱疹病毒 草鱼 亚单位疫苗 包埋 微晶 质型多角体病毒 酵母表达载体 蛋白 构建 抗原表位 家蚕 载体转化酵母菌 碳酸氢钠溶液 多角体蛋白 密码子优化 蛋白基因 甲醇诱导 融合蛋白 盐酸溶液 碳酸钠 抗原 裂解 融合 联合 | ||
【主权项】：
1.一种基于酵母表达载体的蛋白微晶包埋鲤疱疹病毒II型‑草鱼出血病毒亚单位疫苗的构建方法，包括下列步骤：（1）将融合序列克隆进pPICZ A载体构建重组质粒；然后酶切所述重组质粒获线性化重组质粒；所述融合序列为SEQ ID NO:1；（2）将所述线性化重组质粒转化酵母，在含抗生素的YPD平板上培养至形成菌落；然后挑取转化子于含抗生素的YPD培养基中培养至对数生长期，离心收集重组酵母菌，提取基因组DNA，以SEQ ID NO:2 和SEQ ID NO:3为引物进行PCR扩增，然后保存能扩增出包含融合序列片段的重组酵母菌；（3）步骤（2）的重组酵母菌培养至对数生长期，离心收集菌体，接种于BMGY培养基，振荡培养后，诱导培养，然后离心收集酵母菌体；然后破碎获得的酵母菌体，离心纯化获取包埋鲤疱疹病毒II型‑草鱼出血病毒亚单位疫苗的蛋白微晶，即基于酵母表达载体的蛋白微晶包埋鲤疱疹病毒II型‑草鱼出血病毒亚单位疫苗。
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