[发明专利]一种有利于桑黄中黄酮类物质富集的液体发酵培养方法

摘要

本发明公开了一种有利于桑黄中黄酮类物质富集的液体发酵培养方法，包括母种制备和桑黄液体培养，以PDA培养基为基础，在其中加入一定量的蛋白胨，采用液体发酵培养方式，对桑黄菌株进行培养，以期提高桑黄菌丝体中黄酮类化合物含量。本发明的方法中培养基配置简单方便，节约成本，效率较高，黄酮类化合物的产量较高，是一种可以满足市场要求的人工培养方法。

主权项

1.一种有利于桑黄中黄酮类物质富集的液体发酵培养方法，其特征在于，包括母种制备和桑黄液体培养，母种制备的具体步骤如下：步骤一，PDA培养基配方包括土豆180‑210g、葡萄糖17‑22g，再用蒸馏水定容至1L，pH自然值，按照配方制作培养基，各自分装于250mL的锥形瓶中，做好分类标记，用三角瓶封口膜封口，再外扎一层牛皮纸，与其他待灭菌的实验器具一同放入高压蒸汽灭菌锅，115‑125℃下灭菌20‑28min，降至室温后，放入超净工作台，紫外照射15‑20min；步骤二，取生长于固体斜面且生长状况优良的桑黄菌种，在超净工作台中用接种铲取1 mm2的菌块接种于装有PDA液体培养基的培养瓶中，放入25‑28℃以及转速为150‑210转/分钟的恒温振荡培养箱中；步骤三，24小时内培养基中的菌块周围出现了细微的白色菌丝，培养基颜色为淡黄色；72小时内培养基中的菌块变成外周为细密白色菌丝的菌球，培养基颜色为黄色；培养至第五天，菌球数量增加，培养基颜色为深黄色，此时在超净工作台中向培养瓶中加入高压灭菌过的磁力转子，将培养瓶置于磁力搅拌器上，搅拌速度为1500‑1800转/分钟、温度为25‑28℃并且用黑纸遮盖培养；步骤四，24小时后菌液呈黄褐色，菌丝均匀分布于菌液中并且无污染现象，继续搅拌培养，转速调至1200‑1350转/分钟，培养过夜，观察菌液的颜色呈棕褐色，菌液面出现白色浮泡，即液态桑黄母种制备完成，可以进行定量接种；桑黄液体培养的具体步骤如下：步骤一，取土豆180‑210g、葡萄糖17‑22g、蛋白胨并且用蒸馏水定容至1L，蛋白胨的最终浓度为2‑8g/L，PH自然值，制作培养基，各自分装于250mL的锥形瓶中，高温灭菌，放置常温，紫外消毒；步骤二，在超净工作台中对液体培养基接入取桑黄母液500ul进行接种，置于25‑28℃以及转速为150‑180转/分钟的振荡培养箱中培养，72小时各培养基中的情况菌球有8‑12个，直径在1.7‑1.9cm，菌体颜色深黄色，培养一周后各培养基中菌球有35‑45个，直径在0.7‑0.9cm，菌体颜色黄褐色；步骤三，培养15天，菌丝均已成熟，对培养液进行过滤，菌丝体过滤后装至小锥形瓶，封上过滤膜，放入零下85‑零下75℃的冰箱，待冷冻干燥；步骤四，称取菌丝体重量为0.5030‑0.5320g，加入质量分数为95%的乙醇10 mL中并且放置于离心管，超声50‑75min，温度为66‑78℃，离心8‑12 min，取滤液进行旋转蒸发，加入2 mL的色谱甲醇溶解，得到成品。