[发明专利]一种胸腺法新的合成方法

摘要

本发明公开了一种胸腺法新的合成方法，包括以下步骤：a、合成在侧链上有保护基的多肽片段1和多肽片段2；b、将多肽片段1的C端和多肽片段2的N端偶联，然后脱除N端保护基，得到多肽树脂Ⅰ；c、根据胸腺法新的氨基酸序列，按照从C端到N端的顺序依次逐个偶联第11个至第1个氨基酸，脱除N端保护基，再乙酰化，得到胸腺法新树脂；d、胸腺法新树脂酸解脱除C端树脂和所有保护基得到胸腺法新粗品，纯化后获得胸腺法新。本发明所述方法能够大幅度提高产品收率，缩短合成周期。

主权项

1.一种胸腺法新的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：a、合成多肽片段1，所述多肽片段1包含胸腺法新第12‑21的氨基酸序列：Fmoc‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑OH；所述合成多肽片段1的步骤为：Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH在偶联试剂作用下与载体树脂偶联，脱Fmoc保护基得到H‑Glu(OtBu)‑载体树脂，在活化试剂和缩合试剂作用下，依次逐个偶联Fmoc‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑Leu‑OH、Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH、Fmoc‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑Thr(tBu)‑OH、Fmoc‑Thr(tBu)‑OH，偶联后用裂解液裂解，脱除载体树脂得到多肽片段1；合成多肽片段2，所述多肽片段2包含胸腺法新第22‑28的氨基酸序列：NH2‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asp(α‑OtBu)‑氨基树脂；所述合成多肽片段2的步骤为：Fmoc‑Asp(α‑tBu)‑OH在偶联试剂作用下与脱保护后的氨基树脂偶联，脱Fmoc保护基得到H‑Asp(α‑tBu)‑氨基树脂，在活化试剂和缩合试剂作用下依次逐个偶联Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Ala‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Val‑OH、Fmoc‑Val‑OH，脱除N端Fmoc保护基得到多肽片段2；b、多肽片段1的C端和多肽片段2的N端偶联，脱除多肽片段N端Fmoc保护基，得到多肽树脂Ⅰ：NH2‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asp(α‑OtBu)‑氨基树脂；c、步骤b获得的多肽树脂1，在活化试剂和缩合试剂作用下将Fmoc‑Ile‑OH的C端与多肽树脂Ⅰ的N端偶联后，脱Fmoc保护基得到H‑Ile‑多肽树脂Ⅰ，依次逐个偶联Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Ser(tBu)‑OH、Fmoc‑Ser(tBu)‑OH、Fmoc‑Thr(tBu)‑OH、Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH、Fmoc‑Val‑OH、Fmoc‑Aal‑OH、Fmoc‑Aal‑OH、Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH、Fmoc‑Ser(tBu)‑OH，偶联后脱除N端Fmoc保护基，乙酰化反应后得到胸腺法新树脂：Ac‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Ala‑Ala‑Val‑Asp(OtBu)‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Glu(OtBu)‑Ile‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asp(α‑OtBu)‑氨基树脂；d、胸腺法新树脂酸解脱除树脂和所有保护基得到胸腺法新粗品，纯化后获得胸腺法新，所述纯化具体为：胸腺法新粗品，加水搅拌，用氨水调pH7.0至完全溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；采用高效液相色谱法进行纯化，得胸腺法新纯化中间体浓缩液；取胸腺法新纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；采用高效液相色谱法进行换盐，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到胸腺法新醋酸水溶液，冷冻干燥，得胸腺法新纯品。