[发明专利]一株减毒铜绿假单胞菌的构建方法及其在蛋白质转染中的应用有效
| 申请号： | 201810324073.4 | 申请日： | 2018-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN108359630B | 公开（公告）日： | 2021-07-02 |
| 发明（设计）人： | 白芳;刘颖;吴卫辉;靳永新;程志晖;刘畅;许译天;郑瑞萍 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/85;C12R1/385 |
| 代理公司： | 天津耀达律师事务所 12223 | 代理人： | 侯力 |
| 地址： | 300071*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 一株减毒铜绿假单胞菌的构建方法及其在蛋白质转染中的应用。构建方法是，将铜绿假单胞菌Δ8菌株中参与细胞壁肽聚糖合成的谷氨酸消旋酶基因murI删除，从而获得D‑谷氨酸营养缺陷型菌株Δ9。其应用是，Δ9菌株无细胞毒性并保留有完好的III型分泌系统(T3SS)，可将外源蛋白质通过其T3SS高效地注入到哺乳动物细胞中，能够应用于哺乳动物细胞蛋白质转染。Δ9在缺少D‑谷氨酸的培养环境中无法生长，因此，转染后该菌可通过D‑谷氨酸营养限制自行清除。我们分别利用HeLa细胞和小鼠感染模型阐释了该菌体外和体内应用的安全性。本发明对于开发安全、高效的哺乳动物细胞蛋白质转染技术有着积极的意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一株减毒 铜绿 假单胞菌 构建 方法 及其 蛋白质 转染 中的 应用 | ||
【主权项】：
1.一株减毒铜绿假单胞菌的构建方法，其特征在于：将铜绿假单胞菌Δ8菌株基因组中参与细胞壁肽聚糖合成的谷氨酸消旋酶基因murI删除，获得营养缺陷型减毒铜绿假单胞菌菌株Δ9；该菌对哺乳动物细胞无细胞毒性，在不添加外源的D‑谷氨酸时无繁殖能力，能够通过D‑谷氨酸营养缺陷限制抑制细菌的增殖；Δ9菌株的III型分泌系统具有完整功能，能够在短时间内实施对哺乳动物细胞的蛋白质转染。
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