[发明专利]一种动态观察细胞迁移的装置及其方法

摘要

本发明提出了一种可以动态观察细胞迁移运动的装置及其方法，通过凝胶样琼脂糖形成稳定的趋化物浓度梯度，并在活细胞工作站中动态观察细胞的迁移功能，CellSense软件实时测量细胞的迁移距离(Migration distence)、迁移速度(Migration speed)、迁移数量(Migration number)、迁移轨迹(Migration track)、迁移极性化(Migration polarization)等指标，以实现动态评价细胞迁移的多项迁移功能指标。 1

主权项

1.一种动态观察细胞迁移装置，其特征在于：由装有所述凝胶状琼脂糖(1)的圆形培养皿(2)，培养皿中凝胶状琼脂糖围成的细胞用孔(3)，培养皿中凝胶状琼脂糖围成的且与细胞用孔间隔距离的趋化物用孔(4)，培养皿中连通细胞孔与趋化物用孔的凝胶状琼脂糖下细胞迁移观察区域(5)，趋化物孔(4)内的趋化物在凝胶状琼脂糖下缓慢向四周弥散，在细胞迁移观察区域(5)中形成稳定的趋化物浓度差，细胞用孔(3)内的细胞识别趋化物浓度差后发生定向趋化，在凝胶状琼脂糖下发生迁移，向趋化物孔方向趋化，所述培养皿系细胞培养级别，底部为透光材质，采用倒置显微镜观察细胞的迁移。

2.根据权利要求1所述的动态观察细胞迁移装置，其特征在于，所述细胞用孔与趋化物用孔直径均为3.5mm，深度均为3.2mm，间隔距离为2.4mm。

3.一种如权利要求1至2任一项所述的动态观察细胞迁移装置的制备方法，其特征在于：

(1)配置A液：在50mL离心管内依次加入18mL RPMI 1640培养液、2mL澳洲胎牛血清、2mL 10×含钙镁HBSS、8mL滤菌双蒸水，涡旋振荡器上剧烈震荡15秒，充分混匀液体；

(2)配置B液：在50mL离心管内依次加入10mL滤菌双蒸水、0.48g低熔点超纯去热源琼脂糖，涡旋振荡器上剧烈震荡15秒，充分混匀液体；

(3)配置A、B混合液：将A液放入68℃水浴箱中，水浴35分钟，将B液用微波炉加热至沸腾；使用移液器将A液吸至B液离心管内，涡旋振荡器上剧烈震荡15秒，使A、B液充分混匀；

(4)制作凝脂状琼脂糖：移液器吸取A、B混合液3mL至培养皿2中，室温下冷却1小时，再放入4℃冰箱冷却1小时，即可形成凝脂状琼脂糖；

(5)制作细胞用孔、趋化物用孔：培养皿中的凝脂状琼脂糖上分别制作直径均为3.5mm、深度均为3.2mm、孔间距为2.4mm的两个小孔，负压吸引器吸除孔内的凝胶状琼脂糖后室温静置30分钟，再次用负压吸引器吸除孔内析出的液体，左侧小孔即为细胞用孔(3)，右侧小孔即为趋化物用孔(4)。

4.一种动态观察细胞迁移的方法，其特征在于：

(1)向权利要求1至3任一项所述的动态观察细胞迁移装置中分别加入细胞、趋化物：细胞用孔内小心加入10μL细胞悬液，细胞总量10⁵个，趋化物用孔内小心加入10μL趋化物，浓度为0.1‑1μmol/L；趋化物在凝胶状琼脂糖下扩散并能形成稳定的浓度梯度，距趋化物用孔越近趋化物浓度越高，细胞用孔内的细胞则可感受到外界趋化物的浓度变化，并发生定向迁移；

(2)设置活细胞工作站细胞相关参数：打开活细胞工作站细胞培养装置，温度设置为37.2℃，二氧化碳浓度设置为5％，湿度95％，平衡30分钟，根据不同细胞种类设置拍摄参数；

(3)动态观察细胞迁移：将加入细胞、趋化物的观察细胞迁移装置放入活细胞工作站中的培养室内，调整显微镜物镜至观察区域中迁移的细胞，CellSense软件中观察并记录细胞的动态迁移过程。

5.根据权利要求4所述的一种动态观察细胞迁移的方法，其特征在于：所述步骤(2)中拍摄参数，快速迁移细胞设置拍摄总时长为1小时，拍摄间隔为5秒；慢速迁移细胞设置拍摄总时长为10小时，摄间隔为50秒。

6.根据权利要求5所述的一种动态观察细胞迁移的方法，其特征在于：快速迁移细胞为中性粒细胞，慢速迁移细胞为血管内皮细胞。