[发明专利]一种桂枝有效成分潜在用途评价与生产过程监测方法

摘要

本发明为一种桂枝有效成分潜在用途评价与生产过程监测方法，前者主要内容包括运用微量热泳动技术测定桂皮醛与人血清白蛋白的相互作用，从配体亲和力的角度评价其潜在用途，为保证方法的准确性与可靠性，采用了一种经报道与人血清白蛋白有很好结合能力的阳性对照品—布洛芬和两种化合物—芍药苷和甘草酸作为对照；后者的主要内容是应用近红外光谱法对桂枝有效成分桂皮醛生产过程的实时监控为确保所建模型的准确性和稳健性，对模型的五项评价指标进行了综合评价与分析。

主权项

1.一种桂皮醛的潜在用途评价方法，其特征在于，运用微量热泳动技术测定桂皮醛与人血清白蛋白的相互作用，从配体亲和力的角度评价其潜在用途，步骤如下：(1)实验材料：经Cy5生物荧光染料标记过的人血清白蛋白，桂皮醛分析标准品；Trident 1M Tris.HCl缓冲溶液；PEG400表面活性剂；(2)配制检测溶液：①缓冲溶液的制备：取浓度为1.0mol/L的Tris.HCl缓冲溶液，用去离子水稀释，备用；②人血清白蛋白受试液的制备：取人血清白蛋白，用①中的Tris.HCl缓冲溶液溶解；③桂皮醛受试液的制备：取桂皮醛标准品，加入PEG400，然后用①中的Tris.HCl缓冲溶液溶解定容，作为初始浓度的桂皮醛受试储备液；④微量热泳动仪测试液的制备：取12支PCR小管，编号1‑12，分别向2‑12号小管中加入①中稀释后的缓冲溶液，接着取③中初始浓度的桂皮醛受试储备液20μL置于1号PCR管中，从1号管中取10μL至2号管中，混合均匀后吸取10μL至3号管；将3号管中的溶液混合均匀后吸取10μL至4号管；依此等比稀释至12号管；接着取配制好的人血清白蛋白受试液至1‑12号管中，混合均匀即得MST测试液；(3)微量热泳动仪参数设置：使用微量热泳动仪对②中的人血清白蛋白受试液进行预测试，根据预测试结果设定测量参数；(4)桂皮醛与人血清白蛋白亲和力的测定：按(3)的结果设定仪器参数，然后按桂皮醛的实际浓度设置配体初始浓度，接着设定测定的温度，取12根毛细管吸取(2)④中编号1‑12的桂皮醛与人血清白蛋白的测试样品，将样品置于仪器内孵育一定时间后开始测定桂皮醛与人血清白蛋白的相互作用；(5)数据处理与结果分析：使用微量热泳动仪的内置软件NT Analysis Software计算得到不同温度下解离常数Kd值进行数据处理并分析，得到桂皮醛与人血清白蛋白的结合能力以及热力学参数。