[发明专利]一种获得高芦丁含量苦荞种质创制的方法

摘要

本发明涉及一种获得高芦丁含量苦荞种质创制的方法，属于作物遗传育种技术领域，提供了一种利用化学诱变的方法定向筛选芦丁含量变化突变体，方法简便易行，成功率高的获得高芦丁含量苦荞种质创制的方法，采用的技术方案为选择诱变亲本利用EMS化学诱变的方法对种子进行诱变处理，然后在利用高效液相色谱法定向筛选芦丁含量变化突变体，获得了稳定表达的高（低）芦丁苦荞种质，该方法简便易行，成功率高，开拓了苦荞育种领域，丰富了苦荞种质资源。

主权项

1.一种获得高芦丁含量苦荞种质创制的方法，其特征在于：按照以下步骤进行操作，a、选择诱变亲本‘黑丰1号’，该品种为山西省主栽品种，生产性状较好，将50000粒种子浸泡于蒸馏水中，分两份放置于4L矿泉水桶内，振荡过夜；b、将荡过夜后的种子控干水分，然后利用甲基磺酸乙酯溶液对种子进行化学诱变处理，处理完成，在室温条件下，通风橱内以300rpm/min进行振荡，振荡过夜8‑10h，期间轻轻搅动数次；c、振荡结束后取下处理种子的桶，放置2min，加入等体积配制好的0.2 M 硫代硫酸钠上下颠倒混匀，中和静置15min；d、用滤网器过滤掉中和过的EMS水溶液，废液倒入通风橱的下水中，加1L蒸馏水冲洗5次，每次将水用滤网器过滤干净，直到流出的溶液没有泡沫状；e、将所处理的种子倾倒于滤网中，并用塑料袋兜住底部，从通风橱取出后放在洗池中，用流水冲洗5min，空中挂置控干水分，备播；f、土地旋耕、平整后，将诱变后的种子进行行播：行距30cm开沟，开沟深度5‑10cm，每行播30粒种子，第20天统计出苗率，出苗率=出苗数/种子总数×100%，出苗率在30‑50%，表示诱变有效；待长出真叶后直至收获，持续统计变异单株，计算变异率，变异率=表型变异数/成苗总数×100%；表型变异统计主要依据为：叶色变异、株型变异、花色变异、花期变异、籽粒颜色变异、籽粒形态变异；g、单株收获M1代籽粒，单株收获M1代突变体，随机选取1000个单株，高效液相色谱法测定每一单株籽粒的芦丁含量，获得潜在高芦丁突变株系共20个；h、第二年继续种植上述突变体，并分别种植于两个纬度不同地块，每一地块每一株系各种植10个单株，共收获单株400个；高效液相色谱法分别测定各单株芦丁含量，获得在不同地块都高芦丁含量的株系16个；i、继续上述方法持续跟踪筛选直至M5代，获得稳定遗传高芦丁含量突变体6个，其中高芦丁突变体2个，低芦丁突变体4个。