[发明专利]一种高效、稳定的磁性免疫微球的制备和应用

摘要

本发明一种高效、稳定的磁性免疫微球的制备和应用，用于方便、可控的制备磁性免疫微球技术，其通过预活化的磁性微球与带有半胱氨酸的抗原或抗体混合反应，制备磁性免疫微球，用于进行酶联免疫检测。偶联抗原/抗体的磁性微球可以快速的制备，偶联后也可以长期保存，节省了检测的时间和成本，提高了检测的通量。本发明还可以显著提高检测灵敏度。实验结果显示：磁性酶联免疫是将小分子抗原偶联至活化好的磁性微球上，直接进行ELISA检测，节约时间和成本，将具有广泛的应用前景，产生良好的经济效益。

主权项

1.一种高效、稳定的磁性免疫微球的制备，其特征在于，步骤如下：1)磁性微球的选择：磁性免疫微球的制备中，所使用的磁性微球为预活化的磁性微球；2)氨基磁性微球制备：反应体系中磁性微球占30％‑50％，环氧氯丙烷占5‑20％，1‑2M的NaOH，2mg/ml的硼氰化钠，反应温度为20‑40℃，反应时间2‑6小时，去离子水洗至无环氧氯丙烷后，加入5％氨水并在20‑40℃反应10‑24小时，然后去离子水清洗即为氨基磁性微球；3)预活化微球制备：取步骤2)制备的氨基磁性微球100ml，加入100ml去离子水、6‑15g碘乙酸或溴乙酸，再加50％的NaOH调节pH至4.0‑6.0，然后加入10g的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺(EDC)，在15‑30℃的温度下反应1小时后，再调pH至4.0‑6.0后继续反应2‑5小时，即为预活化微球。4)取步骤3)制备的预活化微球10ml，加入10ml含自由巯基的0.1‑1mg/ml抗原溶液，偶联液为50mM三羟甲基氨基甲烷(Tris),5mM乙二胺四乙酸二钠(EDTA‑Na)，pH 8.0‑8.5，在20‑40℃的温度下反应30‑60min；5)将步骤4)反应后产物，再加入50mM的Tris封闭液，5mM的EDTA‑Na,50mM的L‑半胱氨酸，pH调节至8.5，在37℃的温度下反应1小时，即为偶联抗原的磁性免疫磁珠。