[发明专利]一种油棕体细胞悬浮培养获得再生植株的方法有效
| 申请号： | 201810073725.1 | 申请日： | 2018-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN108094214B | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 潘登浪;李炜芳;邹积鑫;曾宪海;林位夫;李哲;曾精 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院橡胶研究所 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 46001 海口翔翔专利事务有限公司 | 代理人： | 莫臻<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 57173*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | 本发明属生物技术领域，涉及一种油棕体细胞悬浮培养获得再生植株的方法，以油棕芯叶为外植体材料直接诱导获得易碎胚性愈伤组织，利用细胞悬浮培养技术大量增殖胚性细胞，再将胚性细胞培养成完整植株。本发明工艺简单，操作方便，其获得无性系植株周期较短，增殖效率较高，且悬浮细胞系具有来源统一,遗传背景一致,生长条件容易控制,生理状态基本相同,发生各种反应更为迅速一致，具有较好的细胞全能性，对高效繁育油棕优良种植材料和应用于生物技术育种以缩短品种选育周期具有现实意义。 | ||
| 搜索关键词： | 油棕 胚性细胞 悬浮培养 再生植株 体细胞 胚性愈伤组织 生物技术领域 生物技术育种 细胞悬浮培养 外植体材料 细胞全能性 悬浮细胞系 易碎 品种选育 生长条件 生理状态 完整植株 现实意义 遗传背景 增殖效率 直接诱导 种植材料 植株 无性系 芯叶 增殖 繁育 应用 统一 | ||
【主权项】：
1.一种油棕体细胞悬浮培养获得再生植株的方法，其特征在于，其步骤如下：/n1)、易碎胚性愈伤组织诱导：取成龄油棕芯叶作为外植体，切成小片，接种到胚性愈伤组织诱导培养基中，在26～30℃下暗培养，110～130天获得易碎胚性愈伤组织；/n所述胚性愈伤组织诱导培养基的成分和配比如下：NH4Cl 1100～1200mg/L+H3BO3 5～7mg/L+KNO3 2490～2510mg/L+Ca(NO3)2 585～615mg/L+NaH2PO4 140～160mg/L+MgSO4·7H2O 350～390mg/L+CuSO4·5H2O 0.023～0.027mg/L+Na2-EDTA 36.3～38.3mg/L+FeSO4·7H2O 27.3～28.3mg/L+MnSO4·4H2O 22.2～22.6mg/L+ZnSO4·5H2O 8.0～8.6mg/L+KI 0.79～8.7mg/L+Na2MoO4·2H2O 0.23～0.27mg/L+CoCl2·6H2O 0.024～0.026mg/L+肌醇80～120mg/L+烟酸0.2～0.8mg/L+盐酸吡哆醇5～15mg/L+盐酸硫胺素5～15mg/L+氨基乙酸2.0mg/L+德夸霉素5～10mg/L+15～30mg/L麦草畏+活性炭1000～2000mg/L+6000mg/L琼脂+蔗糖45000mg/L+泛酸钙0.5～5mg/L+生物素0.05～0.5mg/L+水解酪蛋白500～1000mg/L，培养基灭菌前调其pH5.6；/n2)、悬浮培养：取易碎胚性愈伤组织，按质量体积比为0.5～1：30的比例将易碎胚性愈伤组织加入到含有悬浮培养液的培养瓶中，置于往复式摇床上在100rmp、26～30℃、室内自然散射光条件下培养，每7天继代1次，每次继代时倾去占总体积2/3的上清液，补充新鲜的悬浮培养液至原体积继续培养，至少继代3次；在继代培养过程中，从继代第3次开始，每次继代倾去占总体积的2/3上清液并补充新鲜的液体培养液至原体积后，用20目已灭菌的不锈钢筛网过滤悬浮细胞，只保留能通过20目筛网的悬浮细胞继续培养，即获得生长状态均一、分散性好的细胞团即悬浮细胞系悬浮液；/n所述悬浮培养液的成分和配比如下：NH4Cl 1100～1200mg/L+H3BO35～7mg/L+KNO3 2490～2510mg/L+Ca(NO3)2 585～615mg/L+NaH2PO4 140～160mg/L+MgSO4·7H2O 350～390mg/L+CuSO4·5H2O 0.023～0.027mg/L+Na2-EDTA 36.3～38.3mg/L+FeSO4·7H2O 27.3～28.3mg/L+MnSO4·4H2O 22.2～22.6mg/L+ZnSO4·5H2O 8.0～8.6mg/L+KI 0.79～8.7mg/L+Na2MoO4·2H2O 0.23～0.27mg/L+CoCl2·6H2O 0.024～0.026mg/L+肌醇80～120mg/L+烟酸0.2～0.8mg/L+盐酸吡哆醇5～15mg/L+盐酸硫胺素5～15mg/L+氨基乙酸2.0mg/L+德夸霉素0.1～0.5mg/L+0.5～1.5mg/L麦草畏+蔗糖45000mg/L+泛酸钙0.5～5mg/L+生物素0.05～0.5mg/L+水解酪蛋白500～1000mg/L，培养基灭菌前调其pH5.6；/n3)、植株再生：取悬浮细胞系悬浮液，按体积比为1:45～55的比例将悬浮液移到分化培养基中，在26～30℃，2000lx光照下培养，90～100天获得0.5～1cm大小的体胚；所述分化培养基是以MS为基础培养基，并添加蔗糖3000mg/L+琼脂6000mg/L，pH6.0；/n将获得的0.5～1cm大小的体胚接种到体胚萌芽培养基中，在26～30℃，2000lx光照下培养，30～45天获萌芽植株，萌芽植株继续培养25～35天获得完整植株，然后转入壮苗培养基中，在26～30℃，2000lx光照下进行壮苗培养60天，达到长出2级根，3张叶片以上完整植株；所述体胚萌芽培养基是以MS为基础培养基，并添加蔗糖3000mg/L+琼脂6000mg/L，pH6.0；所述壮苗培养基是以MS为基础培养基，并添加蔗糖3000mg/L，pH6.0。/n
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