[发明专利]一种低氧培养经血来源子宫内膜干细胞的方法

摘要

本发明公开了一种低氧培养经血来源子宫内膜干细胞的方法。该子宫内膜干细胞来源于成年女性经血，培养条件为1‑10％的氧气浓度(优选5％)，该方法具有制备简便，易规模化生产，稳定性好等特点。与常氧培养条件下培养的子宫内膜干细胞相比，缺氧环境下低氧培养的子宫内膜干细胞具有更强的存活能力。

主权项

1.一种低氧培养经血来源子宫内膜干细胞的方法，包括以下步骤(1)经血采集约10ml，立即转移至装有10ml标本保存液的50ml离心管中，混匀；(2)经密度梯度离心法分离子宫内膜干细胞；(3)将细胞接种于T25培养瓶中，加入配制好的完全培养基，混匀，并细胞计数；(4)待细胞的融合率达到80％以上时，胰蛋白酶消化，离心收集细胞；(5)按照适当密度将细胞传代至多个T75培养瓶中继续培养；(6)低氧培养条件：低氧培养的经血来源子宫内膜干细胞培养时CO₂浓度控制为5％，O₂浓度控制为1‑10％(优选5％)，O₂浓度浓度降低通过N₂平衡，其它空气中应有物质的含量与常规常氧培养箱中空气含量一致；(7)常氧培养条件：常氧培养经血来源子宫内膜干细胞培养时CO₂浓度控制为5％，O₂浓度为21％。(8)传至P3‑10代后，胰蛋白酶消化细胞，离心收集细胞，计数并冻存。(9)P4代经血来源子宫内膜干细胞的分化功能和表面标志物检测。