[发明专利]酶促肽连接的方法

摘要

本发明涉及通过第一肽的C‑末端将其与第二肽的N‑末端连接的方法，其中该反应由具有SEQ ID NO：1氨基酸序列的天冬酰胺/天冬氨酸(Asx)肽连接酶OaAEP1 Cys247Ala催化。进一步包括制备一种或多种目标肽的二聚体、低聚体或多聚体的方法，以及通过一种或多种目标肽修饰或标记靶细胞表面的方法。本发明还包括根据任意所述方法得到的连接肽和/或标记的靶细胞，具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的肽连接酶OaAEP1 Cys247Ala，以及包含所述肽连接酶的试剂盒。

主权项

1.形成式(I)的肽的方法：P¹‑Asx‑Xaa¹‑Xaa²‑P²      (I)，通过连接式(II)的第一肽P¹‑Asx‑Xaa³‑Leu‑COOH/CONH₂      (II)至式(III)的第二肽H₂N‑Xaa¹‑Xaa²‑P²      (III)，其中，P¹和P²各自独立地为任意修饰或未修饰的肽，并且任选地可以结合以使式(II)和(III)的肽是相同肽的末端；Asx为Asp或Asn；Xaa¹为任意天然存在的氨基酸；Xaa²为除Pro之外的任意天然存在的氨基酸，优选地为Leu或Ile；Xaa³是任意天然存在的氨基酸，优选地选自His、Ala、Ser、Cys、Asn、Gly、Arg、Met、Lys、Gln、Leu和Glu组成的组，通过酶促裂解所述式(II)的第一肽中“Asx”和“Xaa³”之间的键，并通过所述第一肽的C端将其片段P¹‑Asx连接至所述式(III)的第二肽的N端以形成式(I)的连接肽，其中，酶促裂解和连接反应由具有OaAEP1 Cys247Ala(SEQ ID NO：1)活性的肽连接酶在适于所述裂解和连接反应的条件下催化。