[发明专利]一种特异性吸附牛血红蛋白的分子印迹磁性纳米颗粒

摘要

本发明公开了一种特异性吸附牛血红蛋白的分子印迹磁性纳米颗粒，属于生化分离技术领域。本发明制备了一种具有特异性吸附目标蛋白能力的分子印迹功能化磁性纳米颗粒。该颗粒对于牛血红蛋白的吸附分离条件温和、反应简单快速，可实现在蛋白质混合溶液中对目标蛋白——牛血红蛋白的特异性吸附，为蛋白质的分离与纯化研究奠定良好的基础。

主权项

1.一种制备具有特异性吸附牛血红蛋白能力的分子印迹功能化磁性纳米颗粒的方法，其特征在于，包括一步法制备硅烷化丙烯酸功能化Fe₃O₄磁性纳米颗粒Fe₃O₄@SiO₂‑AA、制备分子印迹磁颗粒；所述一步法制备硅烷化丙烯酸功能化Fe₃O₄@SiO₂‑AA颗粒，包括以下步骤：(1)制备Fe₃O₄磁性纳米颗粒：称取FeSO₄·7H₂O与FeCl₃·6H₂O，加入去离子水和无水乙醇，通入氮气，搅拌反应一段时间后，加入氨水调整pH为10‑11，溶液瞬间由棕红色变为黑色，继续熟化反应，得到Fe₃O₄磁性纳米颗粒沉淀物；(2)Fe₃O₄磁性纳米颗粒的硅烷化丙烯酸功能化修饰：将熟化后的反应体系温度降为28～30℃，逐滴加入TEOS进行硅烷化修饰，搅拌反应1‑3h；将硅烷化修饰后的反应溶液置于外加磁场中，除去上清反应液，将磁颗粒用去离子水清洗数遍后，加入乙醇和丙烯酸，通入氮气，并水浴搅拌反应2‑5h；反应完成后，将功能化修饰后的磁性纳米颗粒置于外加磁场进行分离，清洗后于真空中浓缩干燥；(3)向经过硅烷化丙烯酸功能化修饰得到的Fe₃O₄@SiO₂‑AA颗粒中，依次加入一定量的功能单体甲基丙烯酸和衣康酸，交联剂亚甲基双丙烯酰胺和PBS缓冲溶液，使得相对于PBS缓冲液，以mL/mL计，Fe₃O₄@SiO₂‑AA颗粒的浓度为0.25％‑0.35％，甲基丙烯酸的浓度为0.3％‑0.4％，衣康酸的浓度为0.025％‑0.125％，亚甲基双丙烯酰胺的浓度为0.06％‑0.12％，超声振荡混合后，加入浓度为0.025％‑0.075％的牛血红蛋白混合均匀；(4)将步骤(3)得到的反应体系振荡混匀后，通入氮气除去O₂，加入APS和TEMED作为引发剂于25℃水浴振荡反应10‑14h，反应结束后，倾去反应液，洗脱磁颗粒上的印迹模板，可得到分子印迹磁颗粒。