[发明专利]一种胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂

摘要

本发明之目的是提供一种胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂，包括试剂R1、试剂R2和标准品；试剂R1由甘氨酸、沙丁胺醇‑牛血清白蛋白复合物，调PH至8.6，加蒸馏水定容至 1000ml制成，所述试剂R2由甘氨酸、聚乙二醇6000、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳、牛血请白蛋白、Proclin300，调PH至8.6，加蒸馏水定容至 1000ml制成，本发明组方科学合理，易生产制备，使用方便、安全、准确，可有效用于快速检测食品中的沙丁胺醇，确保食品安全，经济和社会效益显著。

主权项

1.一种胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂，其特征是：本发明试剂包括试剂R1、试剂R2和标准品；所述的试剂R1由甘氨酸 3.75‑15.01g、沙丁胺醇‑牛血清白蛋白复合物 0.2‑1.1g，调PH至8.6，加蒸馏水定容至 1000ml制成，其中，沙丁胺醇‑牛血清白蛋白复合物的制备方法是：沙丁胺醇150mg，加入4ml含22.8mg戊二酸酐的吡啶溶液中，室温搅拌下反应22h，搅拌速度150rpm；反应后真空抽干反应物中的吡啶；沉淀物溶解于8ml由二甲基甲酰胺（DMF）与1,4‑二恶烷按体积比1:1配制成的溶剂中，加入正三丁胺52.4μl和氯甲酸异丁酯28.8μl，2‑4℃下反应1h，随后将该反应液逐滴加入10ml，4℃预冷的质量浓度为0.2%的牛血清白蛋白溶液，4℃反应48小时，反应物在pH7.2磷酸缓冲盐溶液（ PBS）中透析48小时，透析期间，每4小时换磷酸缓冲盐溶液一次，除去未反应的试剂，成沙丁胺醇‑牛血清白蛋白复合物；所述试剂R2由甘氨酸 3.75‑15.01g、聚乙二醇6000 10‑30 g、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳 100‑600mg、牛血清白蛋白（BSA）10‑30 g、Proclin300 1‑5 ml，调PH至8.6，加蒸馏水定容至 1000ml制成，其中，抗沙丁胺醇单抗交联胶乳的制备方法是：(l)活化羧基：称取羧基胶乳颗粒20‑200mg，胶乳颗粒直径50‑500nm，溶于pH6.5,50mM 10ml 的2‑吗啉乙磺酸（MES）中，得胶乳溶液，再将1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDC） 20mg、N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS） 20mg依次加入上述胶乳溶液中，震荡反应1h成活化胶乳，随后22000rpm下离心40分钟，弃去上清液，沉淀使用pH6.5、浓度为50mM的2‑吗啉乙磺酸（MES）10ml复溶，重复离心二次，弃去上清液；沉淀溶于10ml 0.01M 的pH7.2磷酸缓冲盐溶液（ PBS）中，成活化胶乳；(2)活化胶乳每毫升中加入400μg抗沙丁胺醇单克隆抗体，室温搅拌下反应4小时，成反应液，反应液每毫升中加入10%牛血清白蛋白（BSA）溶液500μl，继续室温搅拌反应2小时 ；20000rpm下离心40分钟，弃去上清液，沉淀用0.05M ，pH 8.6 的甘氨酸缓冲液复溶成抗沙丁胺醇抗体羧基胶乳交联的羧基胶乳溶液；标准品制备方法：（1）pH 7.4 0.01M磷酸缓冲盐溶液（ PBS）的配制：将磷酸氢二钠1.44g，磷酸二氢钾 0.24g，氯化钠8 g，氯化钾0.2g用蒸馏水溶解、混匀，定容至1000ml，用盐酸或氢氧化钠调pH值至7.4，备用；（2）标准品的配制：将质量纯度99.5%的沙丁胺醇（购自中国药品生物制品鉴定所对照品）1mg，用pH7.4 ，0.01M磷酸缓冲盐溶液（ PBS）完全溶解，定容至浓度100μg/ml；取10μL ，100μg/ml沙丁胺醇标准品，用pH7.4， 0.01M磷酸缓冲盐溶液（ PBS）定容至浓度100ng/ml；取4mL浓度为 100ng/ml的沙丁胺醇溶液，用pH7.4， 0.01M磷酸缓冲盐溶液（ PBS）定容至浓度4.0ng/ml的标准品。