[发明专利]一种防低温损伤型冻干保护剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种防低温损伤型冻干保护剂的制备方法，属于菌剂材料技术领域。本发明技术方案采用北极鳕鱼中表皮细胞进行提取并收集，将其包裹并分散至冻干保护剂材料内部，保证了表皮蛋白和冰核能够牢牢的吸附在一起，抑制冰核的生长，冰核同表皮蛋白通过范德华表面张力的作用以及氢键的作用，紧密结合在一起，从而使冰核原本结合的水分子释放成自由的水分子，而这一过程可能引起熵值和焓值的改变，熵和焓的变化决定了表皮蛋白同冰核结合的趋势，有效提高水溶液的稳定性，从而提高在低温环境下冰晶产生对细胞菌剂等材料的机械损伤和伤害，提高菌剂材料的抗低温损伤性能。 1

主权项

1.一种防低温损伤型冻干保护剂的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：

（1）取北极鳕鱼并将收集其鱼皮组织，洗涤、干燥并研磨，过200目筛得研磨粉末，按重量份数计，分别称量45～50份缓冲液、3～5份EDTA、0.1～0.2份维生素和10～15份研磨粉末并置于三角烧瓶中，静置6～8h后，离心分离，收集上层清液并真空冷冻干燥，收集得改性蛋白颗粒；

（2）按重量份数计，分别称量55～60份氯仿、10～15份卵磷脂、3～5份胆固醇、2～3份OP‑10、6～8份质量分数5％聚乙烯醇溶液、15～20份缓冲液、6～8份改性蛋白颗粒和3～5份腐殖酸钠置于三角烧瓶中，搅拌混合并超声分n，得分散液；

（3）将分散液旋转蒸发至分散液体积的1/5，收集得分散旋蒸液；

（4）将分散旋蒸液过滤处理并收集滤液，冷冻处理并干燥，即可制备得一种防低温损伤型冻干保护剂的制备方法。

2.根据权利要求1所述的一种防低温损伤型冻干保护剂的制备方法，其特征在于：步骤（1）和步骤（2）所述的缓冲液为pH7.0的磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液。

3.根据权利要求1所述的一种防低温损伤型冻干保护剂的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述的旋蒸蒸发温度为25～30℃。

4.根据权利要求1所述的一种防低温损伤型冻干保护剂的制备方法，其特征在于：步骤（4）所述的过滤膜为孔径为0.8～0.9μm过滤膜。

5.根据权利要求1所述的一种防低温损伤型冻干保护剂的制备方法，其特征在于：步骤（4）所述的冷冻处理并干燥为在‑40℃快速冷冻8h后，再置于真空冷冻干燥机内，于‑50℃冷冻干燥48h。