[发明专利]一种适体和鲁米诺-金纳米粒子功能化的RNA膜及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种适体和鲁米诺‑金纳米粒子功能化的RNA膜及其制备方法和应用，属于生物材料制备技术领域。本发明提供了一种适体和鲁米诺‑金纳米粒子功能化的RNA膜，本发明提供的适体和鲁米诺‑金纳米粒子功能化的RNA膜含有大量的氨基，能够保证所形成的的RNA及RNA膜稳定；鲁米诺‑金纳米粒子对RNA膜的表面修饰能够使其具有电致化学发光的性质；Ramos适体对RNA膜的表面修饰能够使其对Ramos细胞有特异性识别作用。本发明提供的功能化的RNA膜能够实现循环肿瘤细胞的捕获和释放，且APS能够使电致化学发光增强，实现生物传感的高效检测。

主权项

一种适体和鲁米诺‑金纳米粒子功能化的RNA膜，其特征在于，包括RNA膜和功能修饰单元，所述功能修饰单元包括Ramos适体和鲁米诺‑金纳米粒子，所述RNA膜和Ramos适体和鲁米诺‑金纳米粒子分别通过羧基‑氨基和Au‑N键作用力结合；所述适体和鲁米诺‑金纳米粒子功能化的RNA膜的制备方法包括以下步骤：1)将HAuCl₄溶液在加热、搅拌的条件下与鲁米诺溶液混合，得到鲁米诺‑金纳米粒子溶液；2)将5μM磷酸化的DNA 1和5μM的引物1于水中混合，95℃保持2min，冷却至25℃，加入T4连接酶和连接反应缓冲液，25℃连接反应12h，得到环化的DNA1；所述DNA1的序列如SEQ ID NO.1所示；所述引物1的序列如SEQ ID NO.4所示，或所述引物1为在SEQ ID NO.4所示的序列的5’端标记有巯基或生物素的物质；3)将5μM磷酸化的DNA2和5μM的引物1于水中混合，95℃保持2min，冷却至25℃，加入T4连接酶和连接反应缓冲液，25℃连接反应12h，得到环化的DNA2；所述DNA2的序列如SEQ ID NO.2所示；4)将5μM步骤2)得到的所述环化的DNA 1和5μM步骤3)得到的所述环化的DNA2与4mM核糖核苷酸混合物溶液、5UμL^‑1T7RNA聚合酶和滚环转录反应缓冲液混合，在37℃下孵育24小时，得到RNA膜；所述反应缓冲液包括40mM Tris‑HCL、6mM MgCl₂、2mM亚精胺和1mM DTT，pH值为7.9；5)将步骤4)得到的RNA膜与步骤1)得到的鲁米诺‑金纳米粒子溶液混合，37℃进行孵育反应12h，得到鲁米诺‑金纳米粒子功能化的RNA膜；6)将步骤5)得到的鲁米诺‑金纳米粒子功能化的RNA膜中加入20μM的Ramos适体溶液，25℃黑暗中温育12h，得到适体和鲁米诺‑金纳米粒子功能化的RNA膜；所述Ramos适体为在SEQ ID NO.3所示的序列的5’端标记有羧基的物质；所述步骤1)与步骤2)～步骤4)没有时间先后顺序的限定。