[发明专利]人胚胎干细胞向胰腺内分泌谱系的分化

摘要

本发明涉及人胚胎干细胞向胰腺内分泌谱系的分化。本发明提供了用于增加表达胰腺内分泌谱系特征性标记物的细胞中MAFA的表达的方法，所述方法包括在含有足以引起MAFA表达增加的量的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的培养基中培养表达胰腺内分泌谱系特征性标记物的细胞的步骤。

主权项

一种用于产生MAFA表达细胞的群体的方法，所述方法包括：(a) 使人多能干细胞分化成表达定形内胚层谱系特征性标记物的细胞，(b) 使所述表达定形内胚层谱系特征性标记物的人细胞分化成表达胰腺内胚层谱系特征性标记物的人细胞，(c) 使所述表达胰腺内胚层谱系特征性标记物的人细胞分化成表达胰腺内分泌谱系特征性标记物的人细胞，其表达下列中的至少一种：NGN3、NEUROD、ISL1、PDX1、NKX6.1、PAX4和PTF1α；以及(d) 用细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂处理所述表达胰腺内分泌谱系特征性标记物的人细胞，所述细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂选自：7‑正丁基‑6‑(4‑羟苯基)[5H]吡咯并[2,3‑b]吡嗪、9‑硝基‑7,12‑二氢吲哚并[3,2‑d][1]苯并氮杂‑6(5H)‑酮、3‑(6‑氧代‑9‑硝基‑5,6,7,12‑四氢吲哚并[3,2d][1]苯并氮杂‑2‑基)丙腈、(2R)‑2‑((6‑((3‑氨基‑5‑氯苯基)氨基)‑9‑(1‑甲基乙基)‑9H‑嘌呤‑2‑基)氨基)‑3‑甲基‑1‑丁醇、团网菌黄素A、[6‑苄基氨基‑2‑(3‑羟基丙氨基)‑9‑异丙基嘌呤、丁内酯I、(Z)‑1‑(3‑乙基‑5‑甲氧基‑2,3‑二氢苯并噻唑‑2‑亚基)丙‑2‑酮、2‑(3‑羟基丙基氨基)‑6‑(邻羟基苄基氨基)‑9‑异丙基嘌呤、1‑(2,6‑二氯苯基)‑1,5‑二氢‑6‑((4‑(2‑羟基乙氧基)苯基)甲基)‑3‑(1‑甲基乙基)‑4H‑吡唑并[3,4‑d]嘧啶‑4‑酮、Cdk/细胞周期蛋白抑制肽III、3‑(2‑氯‑3‑吲哚亚甲基)‑1,3‑二氢吲哚‑2‑酮、(6‑羟基‑4‑苯基苯并[4,5]呋喃并[2,3‑b])吡啶‑3‑羧酸乙酯、RO‑3306、N‑(顺式‑2‑氨基环己基)‑N‑(3‑氯苯基)‑9‑乙基‑9H‑嘌呤‑2,6‑二胺、6‑环己基甲氧基‑2‑(4’‑氨磺酰苯胺基)嘌呤、5‑氨基‑3‑((4‑(氨基磺酰基)苯基)氨基)‑N‑(2,6‑二氟苯基)‑1H‑1,2,4‑三唑‑1‑硫代甲酰胺、3‑氨基‑1H‑吡唑并[3,4‑b]喹喔啉、Cdk2抑制剂I、Cdk2抑制剂II、2(双‑(羟乙基)氨基)‑6‑(4‑甲氧基苄氨基)‑9‑异丙基嘌呤、4‑(6‑环己基甲氧基‑9H‑嘌呤‑2‑基氨基)‑N,N‑二乙基苯甲酰胺、N4‑(6‑氨基嘧啶‑4‑基)‑对氨基苯磺胺、(4‑(2‑氨基‑4‑甲基噻唑‑5‑基)嘧啶‑2‑基)‑(3‑硝基苯基)胺、2‑溴代‑12,13‑二氢‑5H‑吲哚并[2,3‑a]吡咯并[3,4‑c]咔唑‑5,7(6H)‑二酮、1,4‑二甲氧基吖啶‑9(10H)‑硫酮、5‑(N‑(4‑甲苯基)氨基)‑2‑甲基‑4,7‑二氧代苯并噻唑、4‑(3,5‑二氨基‑1H吡唑‑4‑基偶氮)‑酚、2‑(2‑羟基乙氨基)‑6‑(3‑氯苯胺基)‑9‑异丙基嘌呤、Fascaplysin、靛玉红‑3’‑单肟、5‑碘代‑靛玉红‑3’‑单肟‑5‑磺酸、Isogranulatimide、2‑(2‑羟基乙氨基)‑6‑苄氨基‑9‑甲基嘌呤、6‑(2‑羟基苄氨基)‑2‑((1R)‑(羟甲基)丙基)氨基)‑9‑异丙基嘌呤、5‑溴代‑3‑(2‑(4‑氟苯基)‑2‑氧代乙叉基)‑1,3‑二氢吲哚‑2‑酮、N6,N6‑二甲基腺嘌呤、2‑(1R‑异丙基‑2‑羟基乙氨基)‑6‑(3‑氯苯胺基)‑9‑异丙基‑嘌呤、雷帕霉素、2‑(R)‑(1‑乙基‑2‑羟基乙氨基)‑6‑苄氨基‑9‑异丙基嘌呤、伪枝藻素、3‑[1‑(3H‑咪唑‑4‑基)‑甲‑(Z)‑亚基]‑5‑甲氧基‑1,3‑二氢吲哚‑2‑酮和4‑(3′‑羟基苯基)氨基‑6,7‑二甲氧基喹唑啉。