[发明专利]一种改良CTAB法提取棉花基因组DNA

摘要

本发明公开了一种改良CTAB法提取棉花基因组DNA，包括以下步骤（1）液氮研成粉末，加入CTAB 缓冲液65℃水浴摇动得含有DNA的提取液I；（2）冷却后加入RNase A后进行37℃水浴；（3）加入等体积的溶液A混匀离心得上清液I；（4）继续加入等体积的溶液A混匀离心得上清液II；（5）加入NaAc，然后加入无水乙醇水平摇动形成絮状沉淀；（6）离心，弃上清，洗涤沉弃去无水乙醇，干燥得沉淀DNA；（7）溶解沉淀DNA，保存于‑20℃冰箱中备用。本发明精简了CTAB法提取棉花叶片基因组DNA的步骤程序，大大缩短了实验时间，还降低了DNA提取成本，提高了RNA的消除效果，适合棉花叶片基因组DNA的大批量提取。

主权项

一种改良CTAB法提取棉花基因组DNA，其特征在于，包括以下步骤：（1）取材料，用液氮研成粉末，移入离心管，加入CTAB 缓冲液后充分摇匀，在65℃水浴中反应40~60分钟，每隔10min 轻轻摇动，得到含有DNA的提取液I；（2）将盛有DNA的提取液I离心管放置冰中降温后，加入RNase A后进行水浴；（3）向反应后的DNA的提取液I中加入等体积的溶液A振荡混匀3min，10000r/min离心10min得上清液I；所述溶液A由氯仿：异戊醇按照24:1的体积比混合而成；（4）向上清液I中加入等体积的溶液A，振荡混匀3min，10000r/min离心10min得上清液II；（5）向上清液II中加入0.1倍体积的3M NaAc，然后缓慢加入2倍体积的‑20℃预冷的无水乙醇，水平摇动离心管5min形成絮状沉淀；（6）于10000 r/min、4℃ 下离心5min，弃上清，用70％乙醇清洗沉淀两次，无水乙醇清洗沉淀一次，弃去无水乙醇，干燥得沉淀DNA；（7）溶解沉淀DNA，保存于‑20℃冰箱中备用。