[发明专利]采用过表达IL8RA/B促进间充质干细胞向损伤的血管内皮定向移动的新方法

摘要

本发明公开了一种采用过表达IL8RA/B促进间充质干细胞向损伤的血管内皮定向移动的新方法，本发明第一次使MSCs细胞装载了IL‑8受体A/B,并通过一系列实验证明过表达IL‑8RA/B的hUC‑MSCs的增殖能力不受影响，而且其归巢能力、中和中性粒细胞以及贴附到损伤血管壁的能力明显增强，可以替代过表达IL‑8RA/B的hUVECs用于修复损伤的血管内皮。本研究用重组腺病毒转染hUC‑MSCs使其过表达IL‑8RA/B,通过体外的实验来探究过表达IL‑8RA/B对hUC‑MSCs生物特性的影响,为后期细胞治疗疾病的研究提供有力的依据。

主权项

一种采用过表达IL8RA/B促进间充质干细胞向损伤的血管内皮定向移动的新方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1hUC‑MSCs的分离、培养和鉴定；步骤2重组腺病毒转染hUC‑MSCs；步骤3RT‑PCR检测重组腺病毒感染hUC‑MSCs后IL‑8受体的mRNA的表达；步骤4Western‑blot检测重组腺病毒感染hUC‑MSCs后IL‑8受体的蛋白表达；转膜的条件:内参:250mA,25分钟；IL‑8RA/B:250mA,25分钟；β‑actin比例为1:1000,IL8RA/B比例为1:1000；内参山羊抗小鼠二抗:1:20000,IL‑8RA/B山羊抗小鼠1:10000,内参和IL‑8RA/B；图像用Gel‑pro软件分析；步骤5CCK‑8法检测重组腺病毒对hUC‑MSCs细胞增殖能力的影响；步骤6Transwell实验检测IL8RA/B过表达对hUC‑MSCs迁移能力的影响:Transwell板下室加入600μl含有100ng/ml IL‑8细胞因子的培养基,细胞浓度106个/ml，Transwell板的孔径为8μm；步骤7粘附实验检测IL8RA/B过表达对hUC‑MSCs向体外损伤内皮粘附能力的影响；收集标本时间：15min,30min,60min；步骤8竞争实验检测过表达IL8RA/B的hUC‑MSCs与中性粒细胞竞争性结合于损伤内皮细胞的关系；步骤9统计学方法实验数据全部使用均数±标准差表示；组间比较运用单尾配对t检验；多组比较采用单因素或者多因素方差分析；SPSS22.0统计软件分析数据，P<0.05有统计学意义,；P<0.01有显著统计学意义，P>0.05差异无统计学意义。