[发明专利]一种高灵敏液晶型非标记免疫传感器检测人类β防御素‑2的方法

摘要

本发明提供了一种高灵敏液晶型非标记免疫传感器检测HBD‑2（人类β防御素‑2）的方法，首先在自组装膜修饰的基底表面固定HBD‑2抗体，通过直接免疫反应将HBD‑2抗体结合至传感器基底表面，从而使基底表面形貌发生变化，引起液晶分子的排列取向的变化，导致光学图像信号发生变化，实现对HBD‑2的检测。本发明将液晶生物传感器引入HBD‑2的研究中，实现了简单快速，高灵敏性地检测HBD‑2。

主权项

一种高灵敏液晶型非标记免疫传感器检测 HBD‑2 的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）玻片的预处理切割玻片至所需大小，用新配制的 Piranha 溶液于 80 ℃ 充分浸泡，然后用超纯水清洗，再在无水乙醇中充分浸泡，经 N2 吹干，充分干燥，防尘备用；2）玻片的组装2‑1）上玻片用 DMOAP 溶液组装：将步骤1）预处理的玻片浸于DMOAP 水溶液中，在常温下充分浸泡，用超纯水冲洗， N2 吹干，充分干燥，防尘备用；2‑2）下玻片用 APTES 和 DMOAP 混合溶液组装：将步骤1）预处理的玻片浸入 APTES : DMOAP 质量比为 3‑5 : 1 的乙醇溶液中，于 80℃ 充分浸泡，先用无水乙醇清洗，再用超纯水清洗，N2 吹干，充分干燥，防尘备用；3）HBD‑2 抗体的固定将步骤2‑2）氨基化处理的下玻片用戊二醛溶液于常温下充分浸泡，用超纯水洗净，得到经醛基化修饰的下玻片；将一定浓度的 HBD‑2抗体溶液加在经醛基化修饰的下玻片上，吹开，于 37 ℃ 温育 2 h，用缓冲液冲洗，再用超纯水洗净， N2 吹干备用， HBD‑2 抗体即可通过戊二醛的偶联作用固定在玻片上；4）HBD‑2抗原抗体特异性反应将一定浓度的 HBD‑2 溶液滴加在步骤3）固定有 HBD‑2 抗体的玻片上，吹开，于 37℃ 温育 1 h，抗原抗体即可发生反应；用缓冲液冲洗，再用超纯水冲洗， N2 吹干备用；5）液晶池的制作液晶池由步骤2‑1）得到的上玻片和步骤4）得到的下玻片组装而成，玻片之间设有 Mylar 聚酯片， Mylar 聚酯片一边设有开口，上下玻片通过设置在没有开口的三边边缘的夹子固定；先将液晶 5CB加热到 40℃ 左右使其呈各向同性的液态，然后将其从 Mylar 聚酯片的开口处注入，液晶由于毛细管作用力而布满整个空腔；自然冷却到 28℃ 左右，用偏光显微镜观察。