[发明专利]一种红豆杉针叶RNA提取方法

摘要

本发明公开了一种红豆杉针叶RNA提取方法，步骤包括：取红豆杉针叶组织，液氮研磨成粉末，加入含有5％(V/V)β‑巯基乙醇的预热提取液，温育，加入等体积氯仿：异戊醇(24:1)，离心吸取上清，上清液再次加入等体积氯仿：异戊醇(24:1)，离心吸取上清，上清液加入1/4体积LiCl(6mol/L)，离心沉淀RNA；再用1/20体积NaAC(3mol/L,pH 5.2)和2.5倍预冷的无水乙醇沉淀RNA，最后用RNA‑free水溶解，获得红豆杉针叶RNA。该方法是将现有技术的CTAB法与LiCl结合，在现有针叶RNA提取方法进一步优化，与TRizol试剂盒、SDS酚和传统CTAB法相比，本发明解决了红豆杉针叶RNA提取方法不足，具有快速、稳定、少DNA干扰、操作简单的特点，且获得的红豆杉针叶RNA的提取率和纯度高。

主权项

1.一种红豆杉针叶RNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤(1)裂解：取新鲜红豆杉针叶，液氮研磨后的样品0.5g加入1ml经过70℃预热的提取裂解缓冲液，同时加入50ul的β‑巯基乙醇，涡旋剧烈震荡1min，65℃温育30min，期间上下颠倒混匀数次。(2)抽提：加入等体积的氯仿：异戊醇(按照24：1混匀)，剧烈震荡2min，13000r/min离心10min，吸取上清。反复抽提2次(3)沉淀：加入1/4体积的LiCl(6mol/L)，混匀，‑20℃放置2‑3h，13000r/min离心10min，去上清，沉淀RNA中加入1/20体积DEPC处理的无菌水，加入1/20体积NaAC(3mol/L,pH5.2)，再加入预冷的无水乙醇1.2ml，混匀，于‑70℃放置30min，13000r/min离心10min，去上清，沉淀RNA。