[发明专利]一种乳酶生菌种中脂肪酸组分的检测方法及应用

摘要

本发明提供了一种乳酶生菌种中脂肪酸组分的检测方法及应用，具体步骤包括菌体的收集和干燥、脂肪酸甲酯化、确定气相色谱‑质谱检测脂肪酸的条件，通过气相色谱‑质谱检测分析乳酶生菌种中脂肪酸组分，根据获得的原始光谱数据，计算检测样品内各脂肪酸组分的相对含量。本发明所述的一种乳酶生菌种中脂肪酸组分的检测方法及应用，提出了一种乳酶生菌种鉴别方法，所述甲酯化方法步骤简单，无需加热，甲酯化产率高，检测时间短，分析方便，通过分析脂肪酸含量及组成，在种的水平上对生产菌种进行同源性比对及基源鉴定，对于提高乳酶生片的质量及安全性有十分重要的意义。

主权项

一种乳酶生菌种中脂肪酸组分的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)菌体的收集和干燥将标准菌株及由乳酶生片分离得到的菌株转接入100mL MRS培养基中，37℃培养48h～72h，于4 000r·min‑1离心10min，离心温度5～15℃，倒去上清液，用去离子水反复洗涤2～5次，得到的菌体于60℃真空干燥3h，干燥菌体置于干燥器中，备用；(2)脂肪酸甲酯化精密称取干燥菌体和脂肪酸对照品各50mg分别于螺口试管中，分别向试管加入14％三氟化硼‑甲醇或1％硫酸‑甲醇溶液1～5mL，立即充入N2密封并进行超声波震荡5～15min，置于60～80℃水浴25～40min，取出后加入2mL正己烷，震荡2～5min，取上清液，再用1mL正己烷洗涤，合并上清液，用0.22μm滤膜过滤于干净进样瓶中，用于气相色谱‑质谱分析；(3)气相色谱‑质谱的条件色谱条件：色谱柱为非极性柱，载气为氦气，进样口温度250℃，进样量为1μl，进样分流比10:1，流量1.0mL·min‑1，程序升温为120℃保持5min，然后以6℃·min‑1升温至240℃，保持10min，再以10℃·min‑1升温至260℃，保持2min；质谱条件：离子源EI，电子能量为70eV；溶剂延迟3min；EMV模式为增益系数1，扫描方式为全扫描方式，m/z为35～450；采样频率为2；(4)数据分析及样品鉴定经过步骤(3)后，根据获得的原始光谱数据，计算检测样品内各脂肪酸组分的相对含量。