[发明专利]一种银柴胡组培体系的建立方法

摘要

本发明公开了一种银柴胡组培体系的建立方法，银柴胡为石竹科杆物，8~10月茎叶枯萎时挖取根部，去根茎及须根，泥沙，晒干。药性根呈圆柱形，偶有支根，表面淡黄色或黄白色，根头部有多数疣状突起的茎残基，质轻而脆，易折，折断面不平整，疏松，有裂隙，木质部束与射线黄白相间形成放射状纹理。银柴胡气微，味淡微甜。以根长均匀，外皮淡黄色。主要成份含皂苷，环醇类，如二松醇等。功效清虚热。用于阴虚发热，疳积发热等。本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得银柴胡组织培养再生植株,建立系统的银柴胡组织培养植株再生体系。繁殖系数高，成苗率高，收益大。

主权项

一种银柴胡组培体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体消毒：采集回来的银柴胡茎段以淸水冲洗6min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质,在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒6s，后用无菌水洗3次，再用4%安替富民溶液漂洗5min，用无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸去水分后备用；（2）诱导培养：将步骤（1）消毒好的银柴胡茎段按成对芽为一个单位切成约0.8cm长的茎段，剪去茎段底部处理过程中褐化部分，接种到诱导培养基中进行芽诱导培养,接种后先在25℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照6小时，光照强度为1900lx，置于培养温度为25℃的条件下培养直至形成不定芽;（3）增殖培养：将步骤（2）培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照7小时，光照强度为2900lx，置于培养温度为25℃的条件下培养，29天继代一次；（4）生根培养：将步骤（2）或（3）的芽苗长至1.0cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照11小时，光照强度为2900lx，培养温度为25℃的条件下培养至生根；（5）炼苗移栽：将长至3cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:蛭石＝1：2混合成的基质中于每天光照10小时，光照强度为2900lx，培养温度为25℃，空气湿度为76%的培养箱中培养5天，然后移栽定植。