[发明专利]一种防治水稻纹枯病的方法

摘要

一种防治水稻纹枯病的方法，涉及水稻病虫害的生物防治技术领域，包括以下步骤制备NA固体培养基、制备LB液体培养液、制备种子液、制备发酵液、制备发酵液提取物、制备混配剂、制备咯菌腈·吡唑醚菌酯水乳剂、水稻定殖。发酵提取物混配井冈霉素对水稻纹枯病菌的防治具有协同作用，能显著增强井冈霉素对水稻纹枯病的防治效果，为提高井冈霉素对水稻纹枯病的防治效果提供了一定的理论依据，并为拓展拮抗细菌生物农药的应用提供了一条有效途径。本发明采用咯菌腈·吡唑醚菌酯水乳剂对水稻纹枯病菌的具有显著的防治效果。

主权项

一种防治水稻纹枯病的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：制备NA固体培养基，采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、葡萄糖2.5g，加蒸馏水溶解，定容至1L，PH调至7±0.1，分装后121℃灭菌20min；步骤二：制备LB液体培养液，在950ml去离子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g，搅拌直至溶质溶解，用5mol/LNaOH调pH至7.0，用去离子水定容至1L，在15psi高压下蒸汽灭菌21min；步骤三：将拮抗细菌在NA固体培养基上于37℃活化24h，用无菌水制成菌体悬浮液，取10mL菌体悬浮液接种到装有100mLLB液体培养液的250mL锥形瓶中，在28℃的恒温条件下以220r/min的速率震荡培养48h，得到种子液；步骤四：种子液以10％的接种量接入装有300mLLB液体培养液的1000mL锥形瓶中，磁力搅拌，转速为1000r/min，置于28℃的振荡培养箱中连续培养84h，得发酵液；步骤五：将发酵液和乙酸乙酯以质量比1:2充分混匀萃取48h，取萃取液于40℃旋转蒸发仪中，以110r/min的转速旋转蒸发至膏状，用无菌水溶解，配成质量浓度为1000mg/L的发酵液提取物，置于4℃冰箱保存备用；步骤六：在无菌条件下，将发酵液提取物和质量浓度500mg/L的井冈霉素按质量比4:1混合均匀得混配剂；步骤七：制备咯菌腈·吡唑醚菌酯水乳剂，采用以下重量百分比的原料：咯菌腈原药35％、吡唑醚菌酯7％、聚乙二醇辛基苯基醚4％、吐温5％、甲苯26％、二甲基甲酰胺2％、乙二醇4％、有机硅酮0.5％、水补足至100％；将聚乙二醇辛基苯基醚、吐温及二甲基甲酰胺在室温下加入到充分溶解于甲苯中的咯菌腈和吡唑醚菌酯原药中，形成均一油相，将乙二醇和有机硅酮溶解在水中形成均一水相，在5000r·min‑1高速匀质剪切机中将油相逐滴加入水相，滴加完毕后再充分搅拌，即得咯菌腈·吡唑醚菌酯水乳剂；步骤八：水稻种子用质量浓度70％的乙醇溶液浸泡2min，然后用质量浓度3％的次氯酸钠水溶液浸泡30min，期间用玻璃棒搅动，无菌水冲洗3次，第3次冲洗持续10min，过夜干燥，置于铺有两层湿润滤纸片的培养皿中，再放于37℃恒温培养箱培养4d直至发芽，最后将发芽的水稻种子播种于田地，在水稻生长的第10、20、50和80天向水稻叶面喷洒混配剂，并在水稻生长的第20天向水稻叶面喷洒咯菌腈·吡唑醚菌酯水乳剂。