[发明专利]一种复方杜桑溶液对猪流行性腹泻病毒试验方法

摘要

本发明公开了一种复方杜桑溶液对猪流行性腹泻病毒试验方法，包括以下步骤：S1、材料准备；S2、复方杜桑溶液对细胞安全浓度的测定；S3、复方杜桑溶液对PEDV增殖的抑制作用测定；S4、复方杜桑溶液对PEDV感染仔猪的防治试验；S5、复方杜桑溶液对PEDV传播途径的阻断试验；S6、复方杜桑溶液对PEDV传播途径阻断的临床推广，涉及猪流行性腹泻病毒研究技术领域。该复方杜桑溶液对猪流行性腹泻病毒试验方法，不同规模的猪场进行推广应用，效果良好，研究结果表明，所构建的“母猪产前免疫PED疫苗配合产后使用复方杜桑溶液消毒乳头”模式，可以有效阻断猪场PEDV的大面积感染和发病，为猪腹泻性疫病的综合防控工作探索出一条行之有效的技术思路。

主权项

1.一种复方杜桑溶液对猪流行性腹泻病毒试验方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、材料准备：通过专业试验人员对试验需要的材料进行购买，并对购买的材料进行检测，标记合格；S2、复方杜桑溶液对细胞安全浓度的测定：将复方杜桑溶液用DMEM分别做10个梯度倍比稀释，分别接入已铺满单层Vero细胞的细胞板，每个浓度做两个重复，作用观察时间为25分钟～30分钟，同时设立原液和空白对照；S3、复方杜桑溶液对PEDV增殖的抑制作用测定：将复方杜桑溶液用DMEM分别稀释成32倍、64倍、128倍、256倍、512倍和1024倍后，与JS12株病毒培养液等剂量混匀，使其药物终浓度分别为64倍、128倍、256倍、512倍、1024倍和2048倍，室温作用30分钟～40分钟，再接种Vero细胞，孵育1小时～1.2小时，3d后观察并筛选最佳抑制浓度，同时设立空白对照；S4、复方杜桑溶液对PEDV感染仔猪的防治试验：将复方杜桑溶液作64倍稀释，JS12株病毒培养液作10‑3稀释后备用，将50头1～3日龄健康仔猪随机分为5组，隔离饲养；S5、复方杜桑溶液对PEDV传播途径的阻断试验：选择1个正在发生PED疫情的规模化猪场，筛选待产母猪100头，随机分为10组，每组10头，各组每日的乳头消毒次数分别为12次、10次、8次、6次、5次、4次、3次、2次、1次和0次；同时筛选10头设立为二氯异氰脲酸盐对照组，消毒次数为5～7次/日，各试验组均于分娩后首日应用复方杜桑溶液进行乳头擦拭消毒，持续7d，同时筛选最佳消毒次数，并于每次消毒30min、60min和120min后，随机选择母猪乳头用细胞培养液冲洗，用于PEDV的分离和鉴定，再筛选待产母猪35～45头，隔离饲养，TGE‑PED二联灭活疫苗均于产前40d、20d各免疫1次，分娩后再按筛选的最佳消毒次数进行乳头消毒，持续7d；S6、复方杜桑溶液对PEDV传播途径阻断的临床推广：随机选择规模化猪场、中小型猪场和养猪专业户各3个，每个猪场选择20头待产母猪，隔离饲养，TGE‑PED二联灭活疫苗均为产前40、20d各免疫1次，在其发生PED疫情时开展试验，分娩后按筛选的最佳消毒次数使用复方杜桑溶液进行乳头消毒，共持续7d。