[发明专利]一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法

摘要

本发明公开了一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法，包括如下步骤术前准备、细胞移植和术后处理，本发明的NPC不仅来源广泛,获取方便；增殖能力强，具有较强的细胞活性；具有良好的分化调控性；具备多向分化潜能；可作为基因治疗的良好载体，同时通过本方法进行试验，可以看出在治疗4周后脑瘫患儿的粗大运动功能中卧位与翻身、坐位、行走与主动抓握及手眼协调能力均得到明显改善，所以本发明可以直接阻止脑损伤进程或促进损伤神经的再生。

主权项

一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)术前准备：(一)患儿的准备一、术前检查(1)血液学检查：免疫四项、凝血三项、乙肝六项、肝肾功能、血常规、血型；(2)脑电图：无发作及可疑发作患儿进行常规脑电图检查；对有可疑发作，既往有明显惊厥发作的患儿进行视频脑电图检查或24小时动态脑电图监测；(3)影像资料：半年内头颅MRI检查；(4)术前进行智力运动评估，采用残疾儿童综合功能评估，GMFM88量表；二、知情同意患儿家长或法定监护人自愿接受细胞移植治疗，并已充分了解神经前体细胞移植的风险及可能出现的并发症；(二)细胞制备取孕10‑14周水囊引产人胚胎脑组织，经医院伦理管理委员会通过，在妊娠妇女知情同意情况下，留取胚胎组织，每例胚胎供体均需行家族史、遗传病、传染病、流行病、先天性疾病排查；遗传代谢病筛查；染色体分析及基因病筛查；常见传染病筛查；根据检验结果，排除以上异常供体，留取胚胎脑组织；神经前体细胞(Neural Progenitor Cells,NPC)培养基重悬细胞，置于37℃，5％CO2，饱和湿度的孵箱内静止培养并传代，将神经球分离成细胞悬液，交付使用，与此同时进行NPC活性鉴定，活性>95％，内毒素检测，低于2EU/ml，细胞表面标志分析：CDl33阳性率不低于40％，nestin阳性不低于90％；2)神经前体细胞移植：(一)神经前体细胞脑室内移植(1)时间：第l周；(2)路径：脑室；(3)剂量：(4‑6)×106cells/次；(4)体表定位侧脑室，穿刺针进入脑实质，每向前刺入0.5cm，即将针芯取出一次，看有无脑脊液流出，直至脑室为止，留取2‑3ml脑脊液之后，将置于lml注射器内的NPC缓慢推入侧脑室内；回抽顺利，缓慢冲洗2次，确定注射器内无残留NPC，缓慢拔出穿刺针，按压穿刺点l分钟，缝合穿刺口，无菌敷贴保护伤口；穿刺过程，注意观察患者意识、瞳孔、脉搏、呼吸的改变，若病情突变，应立即停止操作，并进行抢救；(二)神经前体细胞腰椎穿刺移植(1)时间：第2周，第3周；(2)路径：蛛网膜下腔；(3)剂量：(6‑8)×106cells/次；(三)麻醉及术中支持(1)麻醉采用丙泊酚、氯胺酮、咪达唑仑、利多卡因基础麻醉，术中常规吸氧并监测生命体征，出现紧急情况参照应急预案处理；(2)预防出血每例患儿术前予白眉蛇毒凝血酶0.5‑2U，预防出血。3)术后处理：(1)侧脑室内细胞移植术后头低足高位6小时，后去枕平卧48小时；(2)术后心电监护6小时，同时观察瞳孔及神志恢复情况，一旦出现异常立即进行头颅CT检查，除外穿刺出血；(3)加强护理，由护士进行喂养及护理示范；(4)2天内预防感染，术后开始神经营养药物静脉点滴共28天；(5)功能训练：术后48小时后在相关科室附设的康复中心接受相应的综合康复训练。