[发明专利]CRISPR/Cas9靶向敲除人CNE10基因及其特异性gRNA有效
| 申请号： | 201710628429.9 | 申请日： | 2017-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN107267515B | 公开（公告）日： | 2020-08-25 |
| 发明（设计）人： | 朱岷;辛世杰;徐雪姣;许珂;毛会英;李莉;宋萃 | 申请（专利权）人： | 重庆医科大学附属儿童医院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 代玲 |
| 地址： | 400014 *** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明属于分子生物学与生物医学技术领域，具体地说本发明涉及基于CRISPR/Cas9系统的gRNA序列及其组合在敲除人矮小同源合基因（SHOX）保守非编码序列CNE10的应用以及在CNE10调控SHOX基因相关疾病发生过程中的研究。本发明根据CRISPR/Cas9的设计原则，在CNE10基因组的上下游各设计2个最有效靶点，其序列表如SEQ ID NO.1‑4所示，然后将其分别构建在px458载体上，并在CNE10基因组的上下游各筛选得到1个向导RNA（gRNA）。在人骨肉瘤细胞（U2OS）中利用这2个gRNA介导的CRISPR/Cas9系统，可以有效的敲除SHOX保守非编码序列CNE10，该系统操作简便、敲除效率高，适用于研究基因多种功能的细胞模型。本发明涉及的gRNA有望在CNE10调控SHOX基因相关疾病（软骨细胞发育异常、孤独症、Rett综合征及胰腺发育不全）治疗中得到推广应用。 | ||
| 搜索关键词： | crispr cas9 靶向 cne10 基因 及其 特异性 grna | ||
【主权项】：
在CRISPR‑Cas9 特异性敲除人骨肉瘤细胞（U2OS）SHOX保守非编码序列CNE10中用于靶向CNE10的gRNA组合，其对应的 DNA 序列如SEQ ID NO.1和 SEQ ID NO. 4序列所示。
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