[发明专利]一种检测二化螟抗药性的方法

摘要

本发明提供了一种检测二化螟抗药性的方法，在人工饲料浸药法的诊断剂量下制备带药人工饲料薄片，快速检测二化螟田间种群对药剂的抗性水平。所述药剂为三唑磷、阿维菌素、氯虫苯甲酰胺和杀虫单；药剂的诊断剂量:阿维菌素为1.502mg/L，杀虫单为38.8334mg/L，三唑磷为20.9033mg/L，氯虫苯甲酰胺为20.2148mg/L。本发明方法使用简便，可充分反映药剂的毒力和活性，用虫量少，克服了传统生测方法用虫量大，操作繁琐、费时费工等缺点，可用于快速检测二化螟田间种群抗药性水平。

主权项

1.一种检测二化螟抗药性的方法，其特征在于：在人工饲料浸药法的诊断剂量下测试二化螟4龄2日龄幼虫的死亡率，判断二化螟田间种群对药剂是否产生抗药性；所述人工饲料浸药法的诊断剂量通过如下方法得到：(1)二化螟室内敏感种群：在室内一直在未接触任何药剂的条件下，以人工饲料饲养至40余代，且采用单卵块筛选敏感性筛选了3代次的二化螟种群；(2)采用二甲基甲酰胺溶解和稀释三唑磷、阿维菌素和氯虫苯甲酰胺为5‑7个不同的浓度作为毒力测定浓度；采用蒸馏水溶解和稀释杀虫单为5‑7个不同的浓度作为毒力测定浓度；(3)人工饲料制备：①A相的制备：在1000ml水中加入135克麦胚粉、120克蔗糖、45克纤维素、155克酪蛋白和20克酵母粉，搅拌均匀后置于自动蒸汽灭菌器中124℃灭菌30分钟；将180克琼脂放入2000毫升水中，于微波炉中煮熔为止，将煮熔的琼脂溶液加入至上述灭菌后的饲料中并搅拌均匀；②B相的制备：把15克对羟基苯甲酸丙酯钠、15克山梨酸钾、2.5克氯霉素、4克韦氏盐、30克加强维生素混合液、4克氯化胆碱、7毫升40％甲醛、10毫升菜子油和5克胆固醇放入含1000毫升灭菌水的烧杯中，在磁力搅拌器上搅拌溶解20分钟；③待A相的温度下降至60℃时加入B相并搅拌均匀，然后分装于无菌铝盒中，置于4℃冰箱中保存备用；(4)带药人工饲料制备：把步骤(3)制备的人工饲料切成长度1.5cm×宽度1.5cm×厚度1.2mm的薄片，将薄片挑入步骤2制备的不同药液中浸渍10s后捞出，置于与水平面呈45度的不锈钢丝网面上晾干30min，吸去多余药液后，将带药的人工饲料薄片挑入到直径3cm×高9cm的平底玻璃管中；(5)毒力测定：将4龄2日龄敏感二化螟幼虫挑入至步骤(4)中的带药人工饲料的玻璃管中，每个浓度处理10头，进行4次生物学重复；(6)结果及诊断剂量：三唑磷、杀虫单和阿维菌素三种药剂均在药剂处理后48h检查各浓度处理的幼虫死亡数，氯虫苯甲酰胺在药剂处理后96h检查各浓度处理的幼虫死亡数；死亡标准：以尖锐镊子轻触虫体，不能正常爬行者视作为死亡个体；以对照死亡率小于10％为有效测定，并用对照死亡率进行校正，对步骤(5)的结果做毒力回归线，并计算LC99得出各个药剂的诊断剂量。