[发明专利]一种双信号氮包氧化石墨烯量子点适配体传感器制备方法

摘要

本发明涉及一种双信号氮包氧化石墨烯量子点适配体传感器制备方法。该方法为以制备的具有高饱和磁化率及生物相容性的磁性纳米微球MCNCs/PMAA螯合适配体作为捕获探针，金‑氮包氧化石墨烯量子点作为拉曼及荧光基底螯合适配体短链互补DNA作为信号分子，利用适配体、表面增强拉曼光谱及荧光光谱技术构建双信号传感器实现毒素残留检测研究。当毒素存在时，影响适配体在检测体系中的结构，与适配体发生特异性识别结合，从而引起不同浓度信号分子在不同浓度毒素存在下的释放，随后对检测体系进行磁力吸附，上清液中释放的自由信号分子可对拉曼及荧光信号产生不同程度的放大，依据不同拉曼及荧光强度的特征峰图谱，实现毒素残留双信号灵敏间接检测的目的。

主权项

一种双信号氮包氧化石墨烯量子点适配体传感器制备方法，其特征在于，该方法包括如下具体步骤：1)MCNCs/PMAA磁性纳米微球制备：利用溶剂热法合成MCNCs，随后在MCNCs表面修饰PMAA壳，利用蒸馏沉淀聚合法以甲基丙烯酸AA、甲叉双丙烯酰胺MBA作为交联剂，偶氮二异丁腈AIBN为引发剂，在乙腈溶剂中制备MCNCs/PMAA磁性纳米微球；2)MCNCs/PMAA‑适配体捕捉探针制备：具有羧基表面的MCNCs/PMAA磁性纳米微球和具有氨基表面的核酸适配体利用缩合反应制备得到MCNCs/PMAA‑适配体螯合物；3)金‑氮包氧化石墨烯量子点Au‑N‑GQDs制备：取2mL制备的N‑GQDs和2mL蒸馏水加入到50mL园底烧瓶中，在冷凝装置下100度加热反应10min；随后，将0.5mL,0.1M四水氯金酸加入至上述溶液中搅拌反应20min，溶液颜色由黄色变为黑色，10000rpm下离心10min，得到Au‑N‑GQDs待用；4)信号分子cDNA‑Au‑N‑GQDs制备：将120μL巯基化cDNA(10μM)加入到含有1mL Au‑N‑GQDs的离心管中，4℃下反应16h；随后，0.5mL 0.1M PBS缓冲溶液(pH 7.0)和0.5mL 2M氯化钠溶液加入到离心管中；溶液混合放置40h，然后10000rpm下离心30min，用PBS缓冲溶液(pH 7.0)清洗沉淀物，出去未结合cDNA，得到信号分子cDNA‑Au‑N‑GQDs待用；5)基于拉曼光谱的毒素残留检测：首先，将制备的MCNCs/PMAA‑aptamer捕捉探针与cDNA‑Au‑N‑GQDs信号分子混合，37℃下连续震荡反应2h；随后，分别取400μL MCNCs/PMAA‑aptamer/cDNA‑Au‑N‑GQDs生物螯合物分装置一系列平行离心管中，随后，将100μL不同浓度的待检物抗生素原液依次加入到上述离心管中，混合溶液37℃条件下连续震荡反应50min；以加有100μL超纯水的离心管作为对照组；反应结束后，利用磁铁进行MCNCs/PMAA‑aptamer‑抗生素磁性富集，同时利用拉曼光谱在150cm‑1‑2000cm‑1波长范围内对含有不同浓度信号分子的上清液拉曼强度进行测定；6)基于荧光光谱的毒素残留检测：首先，将制备的MCNCs/PMAA‑aptamer捕捉探针与cDNA‑Au‑N‑GQDs信号分子混合，37℃下连续震荡反应2h；随后，分别取400μL MCNCs/PMAA‑aptamer/cDNA‑Au‑N‑GQDs生物螯合物分装置一系列平行离心管中，随后，将100μL不同浓度的待检物抗生素原液依次加入到上述离心管中，混合溶液37℃条件下连续震荡反应50min；以加有100μL超纯水的离心管作为对照组；反应结束后，利用磁铁进行MCNCs/PMAA‑aptamer‑抗生素磁性富集，同时利用荧光光谱在520nm激发波长下对含有不同浓度信号分子的上清液荧光光谱强度进行测定。