[发明专利]一种提高哺乳动物体外受精‑胚胎移植着床成功率的方法

摘要

本发明公开了一种提高哺乳动物体外受精‑胚胎移植着床成功率的方法，(1)制备培养基和洗涤液；(2)获得培养到囊胚阶段的胚胎；(3)将步骤(2)中所得囊胚阶段的胚胎放置在CO2培养箱内的步骤(1)制备的培养基中孵育30分钟，CO2培养箱内的CO2气体浓度为5％，CO2培养箱内的温度37℃；(4)30分钟后取出囊胚，用所述洗涤液洗涤囊胚3次，15秒/次；(5)将洗涤后的囊胚放入移植液中，进行宫腔内移植。本发明用于动物实验可以提高IVF‑ET动物胚胎移植的植入率，为IVF‑ET的畜牧繁育及临床运用具有广泛运用价值。

主权项

一种提高哺乳动物体外受精‑胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备培养基和洗涤液：所述培养基的组成为：17β‑estrodiol 0.5‑1.5μmol/L、NaCl 4‑7g/L、KCl 0.2‑0.5g/L、CaCl2·2H2O 0.1‑0.35g/L、KH2PO4 0.05‑0.2g/L、MgSO4·7H2O 0.2‑0.3g/L、NaHCO3 0.2‑0.45g/L、HEPES 3‑7g/L、Sodium lactate 2‑3g/L、Sodium pyruvate 0.02‑0.06g/L、Glucose 0.5‑1.5g/L、Bovine serum albumin(BSA)2‑6g/L、Penicillin G(potassium salt)0.02‑0.08g/L、Streptomycin sulfate 0.02‑0.08g/L；上述浓度为溶解后终浓度，溶质用双蒸水溶解后，用0.1‑0.3mol/L NaOH调节pH至7.2‑7.4、渗透压285‑287mosmole，采用微孔滤过器滤过后置于无菌容器，4℃保存，保质期2周；所述洗涤液的组成为：NaCl 6‑10g，KCl 0.1‑0.3g，KH2PO4 0.1‑0.35g和K2HPO4 1‑3g，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L，4℃保存；(2)获得培养到囊胚阶段的胚胎：获取雌性卵细胞，在体外正常受精，选取发育速度正常的胚胎，用上述培养基在体外培养至囊胚阶段；(3)将步骤(2)中所得囊胚阶段的胚胎放置在CO2培养箱内的步骤(1)制备的培养基中孵育30分钟，CO2培养箱内的CO2气体浓度为5％，CO2培养箱内的温度37℃；(4)30分钟后取出囊胚，用所述洗涤液洗涤囊胚3次，15秒/次；(5)将洗涤后的囊胚放入移植液中，进行宫腔内移植。