[发明专利]一种黄曲霉毒素B1免疫快速检测装置和检测方法

摘要

本发明提供了一种黄曲霉毒素B₁免疫快速检测装置和检测方法，所述黄曲霉毒素B₁免疫快速检测装置包括样品室、洗涤室和检测室，作为三个功能区，所述样品室、洗涤室和检测室均设有一个盖板，用于加样和取样；所述样品室与洗涤室之间、洗涤室与检测室之间均通过孔道相连通，所述孔道处均设有玻璃插板，实现相邻功能区之间的隔离，互不干扰。检测方法包括：制备功能化探针；均相免疫反应和磁分离；显色和读数。本发明涉及的一体化免疫快速检测装置和检测策略，不仅可以应用于黄曲霉毒素B₁快速检测，对于其它小分子有毒有害化合物免疫快速检测技术的发展同样具有指导和参考价值。

主权项

1.一种利用黄曲霉毒素B₁免疫快速检测装置检测黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于，步骤如下：步骤1、制备功能化探针将30‑100mg商品化Fe₃O₄磁性纳米颗粒加入3‑10mL无水乙醇中，室温超声10‑15min获得均匀悬浮液，加入20‑50μL 3‑氨丙基三乙基硅烷室温搅拌5‑8h，分离获得氨基化磁性纳米颗粒；通过碳二亚胺法将氨基化磁性纳米颗粒和黄曲霉毒素B₁抗原偶联，纯化获得抗原‑磁性纳米颗粒探针；通过过碘酸钠法将黄曲霉毒素B₁单克隆抗体和辣根过氧化物酶偶联，纯化获得抗体‑HRP探针；将抗原‑磁性纳米颗粒探针和抗体‑HRP探针分别保存在含1％BSA和0.1％叠氮化钠的磷酸盐缓冲溶液中备用；步骤2、均相免疫反应和磁分离(1)在样品室中加入25‑50μL抗原‑磁性纳米颗粒探针溶液、25‑50μL各浓度梯度标准品/待检测溶液、50‑100μL抗体‑HRP探针溶液，样品室中反应溶液为0.01mol/L PBS缓冲溶液，将检测装置在涡旋混合器上混合1‑2min，进行均相免疫反应，形成磁性纳米颗粒‑抗原‑抗体‑HRP复合物，在磁场作用下，复合物从均相溶液中分离出来；(2)倾斜检测装置，磁场作用力将磁性纳米颗粒‑抗原‑抗体‑HRP复合物从样品室转移到洗涤室，通过玻璃插板密封各功能区，在洗涤室中加入250‑500μL洗涤液，所述洗涤液为含0.05％吐温‑20的0.01mol/L PBS缓冲溶液，涡旋混合1‑2min，进行洗涤，重复洗涤2‑3次，在磁场作用下，复合物从洗涤液中分离出来；(3)倾斜检测装置，磁场作用力将洗涤后的复合物从洗涤室转移到检测室，通过玻璃插板密封各功能区；步骤3、显色和读数(1)在检测室中加入100‑200μL TMB显色液，所述显色液为含0.4mmol/L TMB和3mmol/LH₂O₂的柠檬酸缓冲溶液，pH 5.0，涡旋混合1‑2min，显色液呈现蓝色程度与待检测黄曲霉毒素B₁溶度成反比例关系；(2)用50‑100μL 2mol/L H₂SO₄终止显色，测定450nm吸光值；(3)通过对系列浓度标准品和待测样品检测，建立检测标准曲线，并对未知样品进行定量；所述黄曲霉毒素B₁免疫快速检测装置包括样品室、洗涤室和检测室，作为三个功能区，所述样品室、洗涤室和检测室均设有一个盖板；所述样品室与洗涤室之间、洗涤室与检测室之间均通过孔道相连通，所述孔道处均设有玻璃插板；所述样品室、洗涤室和检测室尺寸均为(40‑80)mm×(8‑20)mm×(6‑20)mm。