[发明专利]一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸的制备方法

摘要

本发明公开了一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸的制备方法，通过HCG胶体金、免疫胶体金的制备、免疫金垫的制备、反应膜的制备、样品垫的制备，最终进行检测试纸的制备得到。通过上述方式，本发明的人绒毛膜促性腺激素检测试纸的制备方法，制作方法简单，容易进行操作，方便进行推广应用，制得的人绒毛膜促性腺激素检测试纸检测效果好，灵敏度高，检测方法简单，能够随时进行检测。

主权项

一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸的制备方法，其特征在于，包括步骤为：（1）HCG胶体金、免疫胶体金的制备胶体金的制备：取450mL高纯水放入1000mL的烧杯内，再加入14.4mL 2%的氯金酸水溶液，置于磁力搅拌器上加热，加热至沸腾；另取130mL高纯水放入250mL的烧杯内，再加入18.72~28mL 2%的柠檬酸三钠水溶液，置于磁力搅拌器上加热至沸腾；待上述2种溶液都沸腾时，将柠檬酸三钠溶液倒入沸腾的氯金酸溶液中，可看到溶液的颜色由澄清透明→黑色→紫色→深红色，当溶液的颜色完全变为深红色时，继续煮沸40分钟，置室温冷却，加入高纯水稀释；通知QA取样3mL送QC处，1:3稀释后用紫外可见分光光度计在波长450~600nm范围内扫描，最大吸收峰值应在523~528nm处，吸光度为1.05±0.05；2‑8℃避光保存，备用，储存期限1个月；确定0.2M K2CO3溶液的使用量：分别按每1mL胶体金加0.2M K2CO3溶液5、6、7、8、9μL，搅拌均匀后按每1mL胶体金加入鼠抗α‑HCG单抗20μg，静置10min，观察显色，取不变色的第2管胶体金所选用的0.2M K2CO3溶液使用量；HCG免疫胶体金的制备：（a）每1mL胶体金按照1.2的确定结果加入0.2M K2CO3溶液，搅拌10 min；（b）按每1mL胶体金向调好pH的金中加入鼠抗α‑HCG单抗20μg，搅拌120min；（c）按每1mL胶体金加入10% BSA溶液100μL，搅拌120 min；（d）将标记好的胶体金4℃、6000rpm×30min离心，吸取沉淀，将上清液4℃、10000rpm×30min离心，吸取沉淀，再次将上清液4℃、12000rpm×30min离心，吸取沉淀，向收集得到的沉淀中加胶体金重悬液，终体积为胶体金体积的40%，混匀，即得到HCG免疫胶体金；取样150µL，用重悬液稀释20倍，用紫外分光光度计在波长450‑600nm范围内扫描，最大吸收峰值应在530~550nm处，吸光度为0.6±0.1；暂存于2‑8℃冰箱，备用，储存期限7天；（2）免疫金垫的制备选用型号为RB65的玻璃纤维素膜作为免疫金垫材料，裁切成7mm×300mm的金垫长条，按线浓度3.0、4.0、5.0μl/cm，分别喷制，干燥后送检，检测最低检测限、特异性；按上述检验合格的线浓度，将重悬好的免疫胶体金喷于玻璃纤维素膜上, 60℃烘干5~15分钟或18~28℃晾干，密封保存，备用，储存期限14个月；（3）反应膜的制备将硝酸纤维素膜浸润在高纯水中，浸泡2小时后取出晾干，再用膜处理液浸泡10分钟取出晾干，裁切成条带，粘贴在PVC底板上；用划膜机在膜上不同位置分别划上抗β‑HCG单抗（2.0mg/mL，0.2μL/cm）和羊抗鼠IgG抗体（隆基或贤至2.5mg/mL，0.2μL/cm），作为检测线和质控线，60℃±3℃，相对湿度≤30%，烘干2h，密封保存，备用，储存期限14个月；（4）样品垫的制备条型：选用SB08或C‑SAB 0.80作为样品垫材料，放置于样品垫处理液中，确保全部浸湿后取出，相对湿度≤30%风干4h，密封保存，备用，储存期限14个月，使用时用自动裁条机裁切成规格为27mm×300mm玻纤长条（具体规格按照客户要求而定）；卡型：选用SB08或C‑SAB 0.80作为样品垫材料，放置于样品垫处理液中，确保全部浸湿后取出，相对湿度≤30%风干4h，密封保存，备用，储存期限14个月，使用时用自动裁条机裁切成规格为17mm×300mm玻纤长条，具体规格按照客户要求而定；笔型：选用SR62或F‑CT‑048作为样品垫材料，放置于样品垫处理液中，确保全部浸湿后取出，相对湿度≤30%风干4h，密封保存，备用，储存期限14个月，使用时用自动裁条机裁切成规格为41mm×300mm玻纤长条，具体规格按照客户要求而定；（5）检测试纸的制备条型：将免疫金垫、样品垫、吸水纸依次组装到固定有反应膜的粘性PVC底板上( 300mm×80mm )，在样品垫上贴MAX线，吸水纸上贴条型手柄贴纸，切成试纸条；然后将其与1袋干燥剂装入铝箔袋中，封口，4‑30℃保存，有效期14个月；卡型：将免疫金垫、样品垫、吸水纸依次组装到固定有反应膜的粘性PVC底板上( 300mm×60mm )，切成试纸条，装入卡壳；然后将其与1袋干燥剂，1个一次性滴管依次装入铝箔袋中，封口，4‑30℃保存，有效期14个月；笔型：将型号为KB50/C‑SAB 0.80的玻璃纤维素膜、免疫金垫、样品垫、吸水纸依次组装到固定有反应膜的粘性PVC底板上(300mm×94mm)，切成试纸条，装入笔壳；然后将其与1袋干燥剂装入铝箔袋中，封口，4‑30℃保存，有效期14个月。